中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2005年
2期
209-212
,共4页
陈振花%吕秋军%温利青%叶棋浓%曹颖林%周侠
陳振花%呂鞦軍%溫利青%葉棋濃%曹穎林%週俠
진진화%려추군%온리청%협기농%조영림%주협
ISRE%干扰素-α%碱性磷酸酶%药物筛选%报告基因
ISRE%榦擾素-α%堿性燐痠酶%藥物篩選%報告基因
ISRE%간우소-α%감성린산매%약물사선%보고기인
目的建立基于报告基因和干扰素-α(Interferon-α)信号通路的药物筛选模型,用于筛选具有IFN-α样活性的小分子化合物.方法构建带有ISRE(IFN-α stimulated response element)靶序列和报告基因的诱导性表达载体,并将其转染入血管内皮细胞(ECV304)中,筛选报告基因碱性磷酸酶(SEAP)表达受IFN-α诱导的阳性克隆.选取相关的细胞因子干扰素-β、干扰素-γ和生长因子甲状旁腺素(PTH)进行模型特异性考察.结果 ECV304细胞中SEAP的表达受IFN-α的诱导并呈现剂量依赖关系,IFN-α的最高诱导表达率是IFN-β最高诱导表达率的9.0倍、IFN-γ的8.8倍、PTH的9.1倍,具有相对特异性.IFN-α对ECV304细胞无增殖作用.本方法的Z'-因子为0.8,说明此模型具有很好的稳定性.结论本模型的SEAP基因表达水平能够被其特异性配体强诱导表达,利用此模型在96孔板上用化学发光法测定SEAP基因的诱导表达水平可筛选具有IFN-α样活性的小分子化合物.
目的建立基于報告基因和榦擾素-α(Interferon-α)信號通路的藥物篩選模型,用于篩選具有IFN-α樣活性的小分子化閤物.方法構建帶有ISRE(IFN-α stimulated response element)靶序列和報告基因的誘導性錶達載體,併將其轉染入血管內皮細胞(ECV304)中,篩選報告基因堿性燐痠酶(SEAP)錶達受IFN-α誘導的暘性剋隆.選取相關的細胞因子榦擾素-β、榦擾素-γ和生長因子甲狀徬腺素(PTH)進行模型特異性攷察.結果 ECV304細胞中SEAP的錶達受IFN-α的誘導併呈現劑量依賴關繫,IFN-α的最高誘導錶達率是IFN-β最高誘導錶達率的9.0倍、IFN-γ的8.8倍、PTH的9.1倍,具有相對特異性.IFN-α對ECV304細胞無增殖作用.本方法的Z'-因子為0.8,說明此模型具有很好的穩定性.結論本模型的SEAP基因錶達水平能夠被其特異性配體彊誘導錶達,利用此模型在96孔闆上用化學髮光法測定SEAP基因的誘導錶達水平可篩選具有IFN-α樣活性的小分子化閤物.
목적건립기우보고기인화간우소-α(Interferon-α)신호통로적약물사선모형,용우사선구유IFN-α양활성적소분자화합물.방법구건대유ISRE(IFN-α stimulated response element)파서렬화보고기인적유도성표체재체,병장기전염입혈관내피세포(ECV304)중,사선보고기인감성린산매(SEAP)표체수IFN-α유도적양성극륭.선취상관적세포인자간우소-β、간우소-γ화생장인자갑상방선소(PTH)진행모형특이성고찰.결과 ECV304세포중SEAP적표체수IFN-α적유도병정현제량의뢰관계,IFN-α적최고유도표체솔시IFN-β최고유도표체솔적9.0배、IFN-γ적8.8배、PTH적9.1배,구유상대특이성.IFN-α대ECV304세포무증식작용.본방법적Z'-인자위0.8,설명차모형구유흔호적은정성.결론본모형적SEAP기인표체수평능구피기특이성배체강유도표체,이용차모형재96공판상용화학발광법측정SEAP기인적유도표체수평가사선구유IFN-α양활성적소분자화합물.
