生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
3期
381-386
,共6页
赖庆安%刘树滔%卢菀华%陈莉%Toshihide Nishimura%饶平凡
賴慶安%劉樹滔%盧菀華%陳莉%Toshihide Nishimura%饒平凡
뢰경안%류수도%로완화%진리%Toshihide Nishimura%요평범
氨肽酶H(APH)%表达%纯化%酶活
氨肽酶H(APH)%錶達%純化%酶活
안태매H(APH)%표체%순화%매활
氨肽酶H(AminopeptidaseH,APH))是生物组织内一种常见的氨基内肽酶,但因为天然材料中含量很低,基本无法深入研究其催化机理、功能与结构的关系及其在生物体内的确切功能.从鸡肝组织克隆了APH的全基因序列,并把该序列亚克隆到载体pET22b(+)上,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),构建了APH的表达菌株.该菌株经IPTG诱导,在SDS-PAGE上明显出现一条与天然APH理论分子量一致的新增蛋白带,该条带的浓度随着表达时间的延长逐渐加深;6h基本达到平衡,此时重组蛋白占总蛋白的16.7%,表达水平高达94.7mg/L.对表达产物进行了活性检测,纯化和酶学性质分析.发现重组蛋白在亚基构成,热稳定性,最适pH等方面与天然APH基本相同,据此可以确认表达产物确实是APH.发酵液总活力达到1636 u/L.这些结果为APH的催化机理及其在生物体内的功能的阐明奠定了重要的物质基础.
氨肽酶H(AminopeptidaseH,APH))是生物組織內一種常見的氨基內肽酶,但因為天然材料中含量很低,基本無法深入研究其催化機理、功能與結構的關繫及其在生物體內的確切功能.從鷄肝組織剋隆瞭APH的全基因序列,併把該序列亞剋隆到載體pET22b(+)上,然後轉化大腸桿菌Rosetta(DE3),構建瞭APH的錶達菌株.該菌株經IPTG誘導,在SDS-PAGE上明顯齣現一條與天然APH理論分子量一緻的新增蛋白帶,該條帶的濃度隨著錶達時間的延長逐漸加深;6h基本達到平衡,此時重組蛋白佔總蛋白的16.7%,錶達水平高達94.7mg/L.對錶達產物進行瞭活性檢測,純化和酶學性質分析.髮現重組蛋白在亞基構成,熱穩定性,最適pH等方麵與天然APH基本相同,據此可以確認錶達產物確實是APH.髮酵液總活力達到1636 u/L.這些結果為APH的催化機理及其在生物體內的功能的闡明奠定瞭重要的物質基礎.
안태매H(AminopeptidaseH,APH))시생물조직내일충상견적안기내태매,단인위천연재료중함량흔저,기본무법심입연구기최화궤리、공능여결구적관계급기재생물체내적학절공능.종계간조직극륭료APH적전기인서렬,병파해서렬아극륭도재체pET22b(+)상,연후전화대장간균Rosetta(DE3),구건료APH적표체균주.해균주경IPTG유도,재SDS-PAGE상명현출현일조여천연APH이론분자량일치적신증단백대,해조대적농도수착표체시간적연장축점가심;6h기본체도평형,차시중조단백점총단백적16.7%,표체수평고체94.7mg/L.대표체산물진행료활성검측,순화화매학성질분석.발현중조단백재아기구성,열은정성,최괄pH등방면여천연APH기본상동,거차가이학인표체산물학실시APH.발효액총활력체도1636 u/L.저사결과위APH적최화궤리급기재생물체내적공능적천명전정료중요적물질기출.
