大连水产学院学报
大連水產學院學報
대련수산학원학보
JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITY
2008年
4期
252-257
,共6页
王斌%范薇%李艳%丁鉴锋%孙岑%刘永波
王斌%範薇%李豔%丁鑒鋒%孫岑%劉永波
왕빈%범미%리염%정감봉%손잠%류영파
大菱鲆出血性败血症%迟钝爱德华氏菌%19接ELISA技术%竞争ELISA技术
大蔆鲆齣血性敗血癥%遲鈍愛德華氏菌%19接ELISA技術%競爭ELISA技術
대릉평출혈성패혈증%지둔애덕화씨균%19접ELISA기술%경쟁ELISA기술
以大菱鲆 Scophthalmusmaximus 出血性败血症病原菌迟钝爱德华氏菌 Edwardsiella tarda 为抗原,从免疫家兔体内获得高免疫血清,建立快速检测大菱鲆出血性败血症病原迟钝爱德华氏菌的间接ELISA技术.采用棋盘滴定法确定间接ELISA抗原和抗血清的最适工作浓度分别为107个/mL和1:20 000;最低检测菌浓度为104个/mL;抗血清与其他细菌标准菌株的交叉反应结果均为阴性,表明该方法具有较高的特异性.将该方法优化后检测了19尾人工感染出血性败血症并发病的大菱鲆和19尾健康的大菱鲆,阳性检测率分别为89.5%和的10.5%.同时在间接 ELISA 方法的基础上建立竞争 ELISA 检测技术,结果表明:理想的包被抗原浓度为107个/mL,兔抗血清的工作浓度为1:20 000,酶标抗体工作浓度为1:1 000,可测最适范围为2×105～2 X 108个/mL,最低检测菌浓度为2 X 105个/mL,得到回归方程y=-0.3811x+2.2335,R2=0.992.
以大蔆鲆 Scophthalmusmaximus 齣血性敗血癥病原菌遲鈍愛德華氏菌 Edwardsiella tarda 為抗原,從免疫傢兔體內穫得高免疫血清,建立快速檢測大蔆鲆齣血性敗血癥病原遲鈍愛德華氏菌的間接ELISA技術.採用棋盤滴定法確定間接ELISA抗原和抗血清的最適工作濃度分彆為107箇/mL和1:20 000;最低檢測菌濃度為104箇/mL;抗血清與其他細菌標準菌株的交扠反應結果均為陰性,錶明該方法具有較高的特異性.將該方法優化後檢測瞭19尾人工感染齣血性敗血癥併髮病的大蔆鲆和19尾健康的大蔆鲆,暘性檢測率分彆為89.5%和的10.5%.同時在間接 ELISA 方法的基礎上建立競爭 ELISA 檢測技術,結果錶明:理想的包被抗原濃度為107箇/mL,兔抗血清的工作濃度為1:20 000,酶標抗體工作濃度為1:1 000,可測最適範圍為2×105～2 X 108箇/mL,最低檢測菌濃度為2 X 105箇/mL,得到迴歸方程y=-0.3811x+2.2335,R2=0.992.
이대릉평 Scophthalmusmaximus 출혈성패혈증병원균지둔애덕화씨균 Edwardsiella tarda 위항원,종면역가토체내획득고면역혈청,건립쾌속검측대릉평출혈성패혈증병원지둔애덕화씨균적간접ELISA기술.채용기반적정법학정간접ELISA항원화항혈청적최괄공작농도분별위107개/mL화1:20 000;최저검측균농도위104개/mL;항혈청여기타세균표준균주적교차반응결과균위음성,표명해방법구유교고적특이성.장해방법우화후검측료19미인공감염출혈성패혈증병발병적대릉평화19미건강적대릉평,양성검측솔분별위89.5%화적10.5%.동시재간접 ELISA 방법적기출상건립경쟁 ELISA 검측기술,결과표명:이상적포피항원농도위107개/mL,토항혈청적공작농도위1:20 000,매표항체공작농도위1:1 000,가측최괄범위위2×105～2 X 108개/mL,최저검측균농도위2 X 105개/mL,득도회귀방정y=-0.3811x+2.2335,R2=0.992.
