南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
5期
941-944
,共4页
李珉珉%夏承来%毛芹超%姜世勃%刘叔文
李珉珉%夏承來%毛芹超%薑世勃%劉叔文
리민민%하승래%모근초%강세발%류숙문
HIV进入抑制剂%细胞融合%β-半乳糖苷酶%药物筛选%氯酚红β半乳糖苷
HIV進入抑製劑%細胞融閤%β-半乳糖苷酶%藥物篩選%氯酚紅β半乳糖苷
HIV진입억제제%세포융합%β-반유당감매%약물사선%록분홍β반유당감
目的 HIV包膜蛋白能介导细胞与细胞之间的融合,本项目旨在建立一种靶向包膜蛋白的HIV进入抑制剂非感染性定量筛选方法 .方法 将表达包膜蛋白gp120/gp41和Tat等HIV蛋白的HL2/3细胞与表达CD4和由HIV长末端重复片段(LTR)启动的β-半乳糖苷酶的HeLa-CD4-LTR-β-gal细胞混合,采用氯酚红β半乳糖苷(CPRG)为显色底物检测β-半乳糖苷酶的表达.用特异性的HIV进入抑制剂对检测方法 进行验证.结果 HL2/3细胞与HeLa-CD4-LTR-β-gal细胞共育不能形成合胞体,但二者能发生膜融合,导致效应细胞表达的Tat蛋白与靶细胞中LTR结合,启动β-半乳糖苷酶的表达.CPRG方法 能灵敏地检测细胞中β-半乳糖苷酶的含量.特异性的HIV进入抑制剂能够抑制β-半乳糖苷酶的表达,且具有剂量依赖性.结论 这一非感染性定量的方法 能客观定量地筛选作用于HIV进入阶段的抗HIV药物,且操作方便、廉价、无感染性,用于天然和合成来源的小分子抗艾滋病药物的筛选.
目的 HIV包膜蛋白能介導細胞與細胞之間的融閤,本項目旨在建立一種靶嚮包膜蛋白的HIV進入抑製劑非感染性定量篩選方法 .方法 將錶達包膜蛋白gp120/gp41和Tat等HIV蛋白的HL2/3細胞與錶達CD4和由HIV長末耑重複片段(LTR)啟動的β-半乳糖苷酶的HeLa-CD4-LTR-β-gal細胞混閤,採用氯酚紅β半乳糖苷(CPRG)為顯色底物檢測β-半乳糖苷酶的錶達.用特異性的HIV進入抑製劑對檢測方法 進行驗證.結果 HL2/3細胞與HeLa-CD4-LTR-β-gal細胞共育不能形成閤胞體,但二者能髮生膜融閤,導緻效應細胞錶達的Tat蛋白與靶細胞中LTR結閤,啟動β-半乳糖苷酶的錶達.CPRG方法 能靈敏地檢測細胞中β-半乳糖苷酶的含量.特異性的HIV進入抑製劑能夠抑製β-半乳糖苷酶的錶達,且具有劑量依賴性.結論 這一非感染性定量的方法 能客觀定量地篩選作用于HIV進入階段的抗HIV藥物,且操作方便、廉價、無感染性,用于天然和閤成來源的小分子抗艾滋病藥物的篩選.
목적 HIV포막단백능개도세포여세포지간적융합,본항목지재건립일충파향포막단백적HIV진입억제제비감염성정량사선방법 .방법 장표체포막단백gp120/gp41화Tat등HIV단백적HL2/3세포여표체CD4화유HIV장말단중복편단(LTR)계동적β-반유당감매적HeLa-CD4-LTR-β-gal세포혼합,채용록분홍β반유당감(CPRG)위현색저물검측β-반유당감매적표체.용특이성적HIV진입억제제대검측방법 진행험증.결과 HL2/3세포여HeLa-CD4-LTR-β-gal세포공육불능형성합포체,단이자능발생막융합,도치효응세포표체적Tat단백여파세포중LTR결합,계동β-반유당감매적표체.CPRG방법 능령민지검측세포중β-반유당감매적함량.특이성적HIV진입억제제능구억제β-반유당감매적표체,차구유제량의뢰성.결론 저일비감염성정량적방법 능객관정량지사선작용우HIV진입계단적항HIV약물,차조작방편、렴개、무감염성,용우천연화합성래원적소분자항애자병약물적사선.
