CAJ | 학술논문

应用噬菌体展示和重组抗体技术制备抗诺氟沙星(NFLX)单链抗体库,筛选获得抗NFLX高特异性、高亲和力的单链抗体scFv.将NFLX与BSA化学偶联获得的免疫源,免疫Balb/C小鼠,提取脾细胞RNA,反转录获得cDNA.以针对鼠源重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因的特异性引物,扩增获得VH基因和VL基因.通过SOE-PCR法将VH基因和VL基因通过柔性多肽Linker((Gly4Ser)3)拼接成VH-Linker-VL片段,酶切(sfi Ⅰ+NotⅠ)处理后,插入噬粒载体pCANTAB5E,并转化宿主菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07拯救,构建抗NFLX噬菌体单链抗体库.以包被抗原NFLX-OVA包被96孔板,亲和富集法,经三轮淘筛,间接Elisa初步检测重组scFv的特异性抗原结合活性.成功构建噬菌体单链抗体库,获得鼠源抗NFLX特异性的scFv,噬菌体中scFv插入率为90%,获得库容约为1.3×106的抗NFLX噬菌体单链抗体库,筛选得到5株抗NFLX的scFv.为运用噬菌体展示抗体技术制备特异性抗药物单抗及进一步建立药残检测新技术奠定了基础.
응용서균체전시화중조항체기술제비항낙불사성(NFLX)단련항체고,사선획득항NFLX고특이성、고친화력적단련항체scFv.장NFLX여BSA화학우련획득적면역원,면역Balb/C소서,제취비세포RNA,반전록획득cDNA.이침대서원중련가변구(VH)급경련가변구(VL)기인적특이성인물,확증획득VH기인화VL기인.통과SOE-PCR법장VH기인화VL기인통과유성다태Linker((Gly4Ser)3)병접성VH-Linker-VL편단,매절(sfi Ⅰ+NotⅠ)처리후,삽입서립재체pCANTAB5E,병전화숙주균TG1,통과보조서균체M13K07증구,구건항NFLX서균체단련항체고.이포피항원NFLX-OVA포피96공판,친화부집법,경삼륜도사,간접Elisa초보검측중조scFv적특이성항원결합활성.성공구건서균체단련항체고,획득서원항NFLX특이성적scFv,서균체중scFv삽입솔위90%,획득고용약위1.3×106적항NFLX서균체단련항체고,사선득도5주항NFLX적scFv.위운용서균체전시항체기술제비특이성항약물단항급진일보건립약잔검측신기술전정료기출.