遵义医学院学报
遵義醫學院學報
준의의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE ZUNYI
2010年
4期
330-332
,共3页
石蓓%宋付凯%赵然尊%刘志江%龙仙萍%盛瑾
石蓓%宋付凱%趙然尊%劉誌江%龍仙萍%盛瑾
석배%송부개%조연존%류지강%룡선평%성근
EGFP%RAMP1%腺病毒表达栽体%基因重组
EGFP%RAMP1%腺病毒錶達栽體%基因重組
EGFP%RAMP1%선병독표체재체%기인중조
目的 构建携带人受体活性修饰蛋白-1(RAMP1)基因的腺病毒表达载体,为进一步深入研究RAMP1的功能奠定基础.方法 通过基因工程技术将RAMP1基因克隆到穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中;I-Ceu I+I-Sce I双酶切穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1,将回收的GFP-CMV-RAMP1片段,亚克隆至腺病毒骨架载体pAdxsi得到重组腺病毒质粒;重组腺病毒质粒酶切线性化后应用脂质体法转染293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Ad-RAMP1并进行PCR鉴定及滴度测定.结果 构建的重组穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1双酶切后,得到0.8kb(RAMP1)和5.1kb(pShuttle-GFP-CMV)两个片段;重组腺病毒质粒pAdxsi-GFP-CMV-RAMP1用XhoI酶切得到7个片段,而作为对照的空腺病毒质粒只得到6个片段;重组腺病毒Ad-RAMP1 PCR鉴定可见阳性扩增条带;病毒滴度检测达4.5×1011PFU/ml.结论 成功构建了携带人RAMP1基因的重组腺病毒载体,为进一步研究RAMP1的功能研究奠定了基础.
目的 構建攜帶人受體活性脩飾蛋白-1(RAMP1)基因的腺病毒錶達載體,為進一步深入研究RAMP1的功能奠定基礎.方法 通過基因工程技術將RAMP1基因剋隆到穿梭質粒pShuttle-GFP-CMV中;I-Ceu I+I-Sce I雙酶切穿梭質粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1,將迴收的GFP-CMV-RAMP1片段,亞剋隆至腺病毒骨架載體pAdxsi得到重組腺病毒質粒;重組腺病毒質粒酶切線性化後應用脂質體法轉染293細胞進行包裝擴增,得到重組腺病毒Ad-RAMP1併進行PCR鑒定及滴度測定.結果 構建的重組穿梭質粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1雙酶切後,得到0.8kb(RAMP1)和5.1kb(pShuttle-GFP-CMV)兩箇片段;重組腺病毒質粒pAdxsi-GFP-CMV-RAMP1用XhoI酶切得到7箇片段,而作為對照的空腺病毒質粒隻得到6箇片段;重組腺病毒Ad-RAMP1 PCR鑒定可見暘性擴增條帶;病毒滴度檢測達4.5×1011PFU/ml.結論 成功構建瞭攜帶人RAMP1基因的重組腺病毒載體,為進一步研究RAMP1的功能研究奠定瞭基礎.
목적 구건휴대인수체활성수식단백-1(RAMP1)기인적선병독표체재체,위진일보심입연구RAMP1적공능전정기출.방법 통과기인공정기술장RAMP1기인극륭도천사질립pShuttle-GFP-CMV중;I-Ceu I+I-Sce I쌍매절천사질립pShuttle-GFP-CMV-RAMP1,장회수적GFP-CMV-RAMP1편단,아극륭지선병독골가재체pAdxsi득도중조선병독질립;중조선병독질립매절선성화후응용지질체법전염293세포진행포장확증,득도중조선병독Ad-RAMP1병진행PCR감정급적도측정.결과 구건적중조천사질립pShuttle-GFP-CMV-RAMP1쌍매절후,득도0.8kb(RAMP1)화5.1kb(pShuttle-GFP-CMV)량개편단;중조선병독질립pAdxsi-GFP-CMV-RAMP1용XhoI매절득도7개편단,이작위대조적공선병독질립지득도6개편단;중조선병독Ad-RAMP1 PCR감정가견양성확증조대;병독적도검측체4.5×1011PFU/ml.결론 성공구건료휴대인RAMP1기인적중조선병독재체,위진일보연구RAMP1적공능연구전정료기출.
