CAJ | 학술논문

提取人肝癌SMMC-7721细胞和小鼠NSO细胞总RNA,对热休克蛋白10基因(Hspl0)进行RT-PCR扩增、TA克隆和测序.结果表明,从上述2种细胞中获得的cDNA分别由312,313 bp组成,与报道的人HSPE1 mRNA(NM002157)、鼠肌肉Hspel mRNA(NM-008303)序列同源性分别为99%,97%,命名为HSPEl-1和Hspel-Ⅰ,序列分析表明,二者之间在核苷酸水平上的同源性为92%,氨基酸水平上的同源性为97%.将上述2种cDNA进行双酶切、亚克隆,成功构建了重组表达载体pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1,转化大肠杆菌并进行了诱导表达.检测结果表明,pET-28a-HSPE1-1与pET-28a-Hspe1-1均能在大肠杆菌中表达,表达蛋白分子量大小约为14 kDa,与预期大小一致.Western-Blot结果证实了其为目的蛋白,经镍树脂柱纯化,获得了相应的重组蛋白.为进一步研究这2种蛋白的结构、功能及临床应用奠定了基础.
제취인간암SMMC-7721세포화소서NSO세포총RNA,대열휴극단백10기인(Hspl0)진행RT-PCR확증、TA극륭화측서.결과표명,종상술2충세포중획득적cDNA분별유312,313 bp조성,여보도적인HSPE1 mRNA(NM002157)、서기육Hspel mRNA(NM-008303)서렬동원성분별위99%,97%,명명위HSPEl-1화Hspel-Ⅰ,서렬분석표명,이자지간재핵감산수평상적동원성위92%,안기산수평상적동원성위97%.장상술2충cDNA진행쌍매절、아극륭,성공구건료중조표체재체pET-28a-HSPE1-1여pET-28a-Hspe1-1,전화대장간균병진행료유도표체.검측결과표명,pET-28a-HSPE1-1여pET-28a-Hspe1-1균능재대장간균중표체,표체단백분자량대소약위14 kDa,여예기대소일치.Western-Blot결과증실료기위목적단백,경얼수지주순화,획득료상응적중조단백.위진일보연구저2충단백적결구、공능급림상응용전정료기출.