上海医学
上海醫學
상해의학
SHANGHAI MEDICAL JOURNAL
2012年
2期
137-140
,共4页
T淋巴细胞凋亡%TRIM21%c-FLICE抑制蛋白
T淋巴細胞凋亡%TRIM21%c-FLICE抑製蛋白
T림파세포조망%TRIM21%c-FLICE억제단백
目的 探讨E3连接酶TRIM21在anti-Fas诱导的T淋巴细胞凋亡中的作用及其分子机制,为评价TRIM21在临床上的应用奠定基础.方法 构建TRIM21真核表达载体,设计TRIM21干扰片段,分别将它们过度表达于Jurkat T淋巴细胞中.将流式细胞仪分选的阳性细胞分为空载无药物组、空载药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21无药物组和TRIM21药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)分别进行药物处理,将转入对照双链小干扰RNA(siRNA)与TRIM21 siRNA的Jurkat T淋巴细胞分为对照siRNA无药物组、对照siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h)、TRIM21 siRNA无药物组和TRIM21 siRNA药物处理组(anti-Fas 20 ng/mL处理3 h),并采用Annexin V/碘化丙啶双染法测定Jurkat T淋巴细胞的凋亡率.将分选Jurkat T淋巴细胞分为空载组和TRIM21过表达组,分别采用蛋白质免疫印迹法与实时定量聚合酶链反应检测TRIM21过度表达对抗凋亡蛋白c-FLICE抑制蛋白(FLIP)的蛋白质及mRNA水平表达的影响.结果 空载药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于空载无药物组(P＜0.001),TRIM21药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率显著高于TRIM21无药物组(P＜0.001).对照siRNA药物处理组的JurkatT淋巴细胞凋亡率显著高于对照siRNA无药物组(P＜0.001),但TRIM21 siRNA药物处理组的Jurkat T淋巴细胞凋亡率大大降低,显著低于对照siRNA药物处理组(P＜0.001).以空载组的c-FLIP(L)蛋白质表达量为100％,TRIM21过表达组则为(31.25±0.25)％.以空载组的c-FLIP(L) mRNA表达量为100％,TRIM21过表达组则为(25.60±3.33)％.结论 TRIM21能抑制抗凋亡蛋白c-FLIP的表达,增强T淋巴细胞对Fas诱导细胞凋亡的敏感性.
目的 探討E3連接酶TRIM21在anti-Fas誘導的T淋巴細胞凋亡中的作用及其分子機製,為評價TRIM21在臨床上的應用奠定基礎.方法 構建TRIM21真覈錶達載體,設計TRIM21榦擾片段,分彆將它們過度錶達于Jurkat T淋巴細胞中.將流式細胞儀分選的暘性細胞分為空載無藥物組、空載藥物處理組(anti-Fas 20 ng/mL處理3 h)、TRIM21無藥物組和TRIM21藥物處理組(anti-Fas 20 ng/mL處理3 h)分彆進行藥物處理,將轉入對照雙鏈小榦擾RNA(siRNA)與TRIM21 siRNA的Jurkat T淋巴細胞分為對照siRNA無藥物組、對照siRNA藥物處理組(anti-Fas 20 ng/mL處理3 h)、TRIM21 siRNA無藥物組和TRIM21 siRNA藥物處理組(anti-Fas 20 ng/mL處理3 h),併採用Annexin V/碘化丙啶雙染法測定Jurkat T淋巴細胞的凋亡率.將分選Jurkat T淋巴細胞分為空載組和TRIM21過錶達組,分彆採用蛋白質免疫印跡法與實時定量聚閤酶鏈反應檢測TRIM21過度錶達對抗凋亡蛋白c-FLICE抑製蛋白(FLIP)的蛋白質及mRNA水平錶達的影響.結果 空載藥物處理組的Jurkat T淋巴細胞凋亡率顯著高于空載無藥物組(P＜0.001),TRIM21藥物處理組的Jurkat T淋巴細胞凋亡率顯著高于TRIM21無藥物組(P＜0.001).對照siRNA藥物處理組的JurkatT淋巴細胞凋亡率顯著高于對照siRNA無藥物組(P＜0.001),但TRIM21 siRNA藥物處理組的Jurkat T淋巴細胞凋亡率大大降低,顯著低于對照siRNA藥物處理組(P＜0.001).以空載組的c-FLIP(L)蛋白質錶達量為100％,TRIM21過錶達組則為(31.25±0.25)％.以空載組的c-FLIP(L) mRNA錶達量為100％,TRIM21過錶達組則為(25.60±3.33)％.結論 TRIM21能抑製抗凋亡蛋白c-FLIP的錶達,增彊T淋巴細胞對Fas誘導細胞凋亡的敏感性.
목적 탐토E3련접매TRIM21재anti-Fas유도적T림파세포조망중적작용급기분자궤제,위평개TRIM21재림상상적응용전정기출.방법 구건TRIM21진핵표체재체,설계TRIM21간우편단,분별장타문과도표체우Jurkat T림파세포중.장류식세포의분선적양성세포분위공재무약물조、공재약물처리조(anti-Fas 20 ng/mL처리3 h)、TRIM21무약물조화TRIM21약물처리조(anti-Fas 20 ng/mL처리3 h)분별진행약물처리,장전입대조쌍련소간우RNA(siRNA)여TRIM21 siRNA적Jurkat T림파세포분위대조siRNA무약물조、대조siRNA약물처리조(anti-Fas 20 ng/mL처리3 h)、TRIM21 siRNA무약물조화TRIM21 siRNA약물처리조(anti-Fas 20 ng/mL처리3 h),병채용Annexin V/전화병정쌍염법측정Jurkat T림파세포적조망솔.장분선Jurkat T림파세포분위공재조화TRIM21과표체조,분별채용단백질면역인적법여실시정량취합매련반응검측TRIM21과도표체대항조망단백c-FLICE억제단백(FLIP)적단백질급mRNA수평표체적영향.결과 공재약물처리조적Jurkat T림파세포조망솔현저고우공재무약물조(P＜0.001),TRIM21약물처리조적Jurkat T림파세포조망솔현저고우TRIM21무약물조(P＜0.001).대조siRNA약물처리조적JurkatT림파세포조망솔현저고우대조siRNA무약물조(P＜0.001),단TRIM21 siRNA약물처리조적Jurkat T림파세포조망솔대대강저,현저저우대조siRNA약물처리조(P＜0.001).이공재조적c-FLIP(L)단백질표체량위100％,TRIM21과표체조칙위(31.25±0.25)％.이공재조적c-FLIP(L) mRNA표체량위100％,TRIM21과표체조칙위(25.60±3.33)％.결론 TRIM21능억제항조망단백c-FLIP적표체,증강T림파세포대Fas유도세포조망적민감성.
