生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2012年
2期
180-182
,共3页
柯波%林宇翔%绳纪坡%于芳%罗维%马祖兴%胡宝成
柯波%林宇翔%繩紀坡%于芳%囉維%馬祖興%鬍寶成
가파%림우상%승기파%우방%라유%마조흥%호보성
肿瘤睾丸抗原CT45家族5号成员基因%小干扰RNA%脆性组氨酸三联体%表达载体
腫瘤睪汍抗原CT45傢族5號成員基因%小榦擾RNA%脆性組氨痠三聯體%錶達載體
종류고환항원CT45가족5호성원기인%소간우RNA%취성조안산삼련체%표체재체
目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果.方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5基因的siRNA进行预测,从中筛选出2对合理的CT45-5-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 Hygro中,转化大肠杆菌DHSα,挑取阳性克隆进行测序鉴定；将构建的CT45-5-siRNA重组载体转染人宫颈癌细胞HeLa及HeLa/Fhit细胞,Western印迹检测siRNA对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5及外源Fhit基因表达的干扰效果.结果:构建了2个CT4 5-5-siRNA重组质粒,其中一条对CT45-5基因具有明显的干扰作用,并且Fhit基因表达也被抑制.结论:构建的CT45-5-siRNA为与CT45 -5功能相关的基因研究奠定了基础.
目的:構建腫瘤睪汍抗原CT45傢族中5號成員基因(CT45-5)的小榦擾RNA(siRNA),併檢測其對HeLa及HeLa/Fhit細胞內源性CT45-5基因及外源脆性組氨痠三聯體(Fhit)基因錶達的榦擾效果.方法:根據CT45-5基因序列,通過生物信息學方法對靶嚮CT45-5基因的siRNA進行預測,從中篩選齣2對閤理的CT45-5-siRNA,將其剋隆到siRNA錶達載體pSilencer 2.1-U6 Hygro中,轉化大腸桿菌DHSα,挑取暘性剋隆進行測序鑒定；將構建的CT45-5-siRNA重組載體轉染人宮頸癌細胞HeLa及HeLa/Fhit細胞,Western印跡檢測siRNA對HeLa及HeLa/Fhit細胞內源性CT45-5及外源Fhit基因錶達的榦擾效果.結果:構建瞭2箇CT4 5-5-siRNA重組質粒,其中一條對CT45-5基因具有明顯的榦擾作用,併且Fhit基因錶達也被抑製.結論:構建的CT45-5-siRNA為與CT45 -5功能相關的基因研究奠定瞭基礎.
목적:구건종류고환항원CT45가족중5호성원기인(CT45-5)적소간우RNA(siRNA),병검측기대HeLa급HeLa/Fhit세포내원성CT45-5기인급외원취성조안산삼련체(Fhit)기인표체적간우효과.방법:근거CT45-5기인서렬,통과생물신식학방법대파향CT45-5기인적siRNA진행예측,종중사선출2대합리적CT45-5-siRNA,장기극륭도siRNA표체재체pSilencer 2.1-U6 Hygro중,전화대장간균DHSα,도취양성극륭진행측서감정；장구건적CT45-5-siRNA중조재체전염인궁경암세포HeLa급HeLa/Fhit세포,Western인적검측siRNA대HeLa급HeLa/Fhit세포내원성CT45-5급외원Fhit기인표체적간우효과.결과:구건료2개CT4 5-5-siRNA중조질립,기중일조대CT45-5기인구유명현적간우작용,병차Fhit기인표체야피억제.결론:구건적CT45-5-siRNA위여CT45 -5공능상관적기인연구전정료기출.
