CAJ | 학술논문

目的:探讨小鼠纤维介素蛋白2(fgl2)的miRNA(微小RNA)表达质粒在体外对相应基因表达的干预效应及在体内对重型肝炎小鼠的治疗作用.方法:分别构建产生小鼠fgl2-miRNA的表达载体(P-mfgl2-miRNA),将其转染到中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中.实验分组:将P-mfgl2-miRNA与小鼠fgl2的表达质粒(pcDNA3.1-mfgl2)共转染到CHO细胞作为干预组,无关序列miRNA表达质粒(irrelevant P-miRNA)与pcDNA3.1-mfgl2共转染为非相关对照组,仅转染pcDNA3.1-mfgl2为阳性对照组,未转染任何质粒为空白对照组.通过实时荧光定量PCR及Western blot观察fgl2在基因转录水平及蛋白水平表达量的改变.建立重型肝炎小鼠模型,通过尾静脉高压注射P-mfgl2-miRNA者为治疗组,注射irrelevant P-miRNA者为非相关组,注射相同剂量生理盐水者为阴性对照组,观察P-mfgl2-miRNA对重型肝炎小鼠的治疗作用.结果:成功构建了针对小鼠fgl2的miRNA.在CHO细胞中,干预组fgl2在RNA水平及蛋白水平的表达均较非相关对照组显著降低.P-mfgl2-miRNA可提高重型肝炎小鼠生存率至8.3％.结论:Fgl2可作为重型肝炎基因治疗的靶点,利用miRNA沉默fgl2基因将有利于重型肝炎的治疗,为后续的进一步研究奠定了基础.
목적:탐토소서섬유개소단백2(fgl2)적miRNA(미소RNA)표체질립재체외대상응기인표체적간예효응급재체내대중형간염소서적치료작용.방법:분별구건산생소서fgl2-miRNA적표체재체(P-mfgl2-miRNA),장기전염도중국창서란소(CHO)세포중.실험분조:장P-mfgl2-miRNA여소서fgl2적표체질립(pcDNA3.1-mfgl2)공전염도CHO세포작위간예조,무관서렬miRNA표체질립(irrelevant P-miRNA)여pcDNA3.1-mfgl2공전염위비상관대조조,부전염pcDNA3.1-mfgl2위양성대조조,미전염임하질립위공백대조조.통과실시형광정량PCR급Western blot관찰fgl2재기인전록수평급단백수평표체량적개변.건립중형간염소서모형,통과미정맥고압주사P-mfgl2-miRNA자위치료조,주사irrelevant P-miRNA자위비상관조,주사상동제량생리염수자위음성대조조,관찰P-mfgl2-miRNA대중형간염소서적치료작용.결과:성공구건료침대소서fgl2적miRNA.재CHO세포중,간예조fgl2재RNA수평급단백수평적표체균교비상관대조조현저강저.P-mfgl2-miRNA가제고중형간염소서생존솔지8.3％.결론:Fgl2가작위중형간염기인치료적파점,이용miRNA침묵fgl2기인장유리우중형간염적치료,위후속적진일보연구전정료기출.