中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2012年
10期
53-57
,共5页
王文秀%沈志强%王善辉%张松林%池贤凤%夏小静
王文秀%瀋誌彊%王善輝%張鬆林%池賢鳳%夏小靜
왕문수%침지강%왕선휘%장송림%지현봉%하소정
猪圆环病毒2型%ORF2基因%Sf9昆虫细胞%表达
豬圓環病毒2型%ORF2基因%Sf9昆蟲細胞%錶達
저원배병독2형%ORF2기인%Sf9곤충세포%표체
本试验采用PCR方法扩增出完整的PCV2 ORF2基因,并将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1TM中,获得重组转移载体pFast-ORF2,再将其转化DH10Bac感受态细胞,发生转座反应,通过抗性及蓝白斑筛选获得含有ORF2基因的重组杆粒,通过Cellfectin转染试剂介导将重组杆粒DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒.用该重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,并通过间接免疫荧光法和Western blotting检测目的蛋白的表达.结果表明,ORF2基因在昆虫细胞中获得表达,表达的蛋白质可被PCV2阳性血清识别,这为进一步研究PCV2亚单位疫苗及诊断抗原奠定了基础.
本試驗採用PCR方法擴增齣完整的PCV2 ORF2基因,併將其剋隆到Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統的轉移載體pFastBac1TM中,穫得重組轉移載體pFast-ORF2,再將其轉化DH10Bac感受態細胞,髮生轉座反應,通過抗性及藍白斑篩選穫得含有ORF2基因的重組桿粒,通過Cellfectin轉染試劑介導將重組桿粒DNA轉染Sf9昆蟲細胞,穫得重組桿狀病毒.用該重組桿狀病毒感染Sf9昆蟲細胞,併通過間接免疫熒光法和Western blotting檢測目的蛋白的錶達.結果錶明,ORF2基因在昆蟲細胞中穫得錶達,錶達的蛋白質可被PCV2暘性血清識彆,這為進一步研究PCV2亞單位疫苗及診斷抗原奠定瞭基礎.
본시험채용PCR방법확증출완정적PCV2 ORF2기인,병장기극륭도Bac-to-Bac간상병독표체계통적전이재체pFastBac1TM중,획득중조전이재체pFast-ORF2,재장기전화DH10Bac감수태세포,발생전좌반응,통과항성급람백반사선획득함유ORF2기인적중조간립,통과Cellfectin전염시제개도장중조간립DNA전염Sf9곤충세포,획득중조간상병독.용해중조간상병독감염Sf9곤충세포,병통과간접면역형광법화Western blotting검측목적단백적표체.결과표명,ORF2기인재곤충세포중획득표체,표체적단백질가피PCV2양성혈청식별,저위진일보연구PCV2아단위역묘급진단항원전정료기출.
