癌症
癌癥
암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2006年
5期
570-575
,共6页
王化丽%张淑兰%鲁艳明%姜继勇%朱晓钰
王化麗%張淑蘭%魯豔明%薑繼勇%硃曉鈺
왕화려%장숙란%로염명%강계용%주효옥
卵巢肿瘤%SKOV3细胞%肝细胞生长因子%明胶酶B%核转录因子%信号转导
卵巢腫瘤%SKOV3細胞%肝細胞生長因子%明膠酶B%覈轉錄因子%信號轉導
란소종류%SKOV3세포%간세포생장인자%명효매B%핵전록인자%신호전도
背景与目的:肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)与其受体c-met特异性结合,激活多条信号转导通路,在调节肿瘤侵袭、转移和血管形成中起重要作用.HGF和c-met在卵巢癌组织中异常表达.本研究拟探讨HGF在卵巢癌的侵袭中的作用、可能机制及其信号转导途径.方法:Boyden小室体外侵袭实验检测HGF对卵巢癌SKOV3细胞穿透人工重组基底膜能力的影响;应用荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real time RT-PCR)、Western blot和流式细胞术检测HGF和核转录因子(nuclear factor κB,NFκB)抑制剂吡咯醛二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)作用前后SKOV3细胞c-met、明胶酶B(gelatinase B,MMP-9)mRNA和蛋白表达的变化;采用免疫细胞化学方法和Western blot检测HGF对SKOV3细胞核NFκB蛋白的影响.结果:(1)HGF作用后,SKOV3细胞侵入基底膜的细胞数为343±13,较对照组(167±11)明显升高(P＜0.01),而PDTC可以减弱HGF的促进作用(241±10,P＜0.01).(2)HGF作用后,SKOV3细胞MMP-9 mRNA水平升高(5.66±0.10)倍(P＜0.01),而经PDTC处理后只升高(2.75±0.80)倍(P＜0.01),c-met mRNA无变化.(3)HGF作用后,SKOV3细胞c-met、MMP-9蛋白阳性率为(96.6±2.0)%和(74.6±4.4)%,较对照组(73.3±2.4)%和(16.0±2.9)%显著增高(P＜0.01),c-met、MMP-9蛋白表达强度分别为2.84±0.18和2.94±0.13,较对照组1.65±0.19和0.54±0.18显著增高(P＜0.01).(4)PDTC可显著抑制HGF对SKOV3细胞蛋白表达的促进作用,MMP-9蛋白阳性率和蛋白表达强度分别为(25.8±3.7)%和0.87±0.14,与对照组和HGF组的差异有显著性(P＜0.05);对c-met蛋白表达无影响(P＞0.05).(5)HGF作用后细胞核NFκB蛋白表达随时间延长而增加,于1 h达高峰,表达强度为1.16±0.21,较无HGF作用的0.42±0.11明显升高(P＜0.01),PDTC可显著抑制HGF对NFκB的活化作用,使NFκB的表达强度降为0.38±0.12(P＜0.01).结论:HGF促进SKOV3细胞的侵袭作用,其机制可能为HGF通过c-met调控NFκB的活化,间接激活MMP-9的基因,促进MMP-9蛋白的合成.
揹景與目的:肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)與其受體c-met特異性結閤,激活多條信號轉導通路,在調節腫瘤侵襲、轉移和血管形成中起重要作用.HGF和c-met在卵巢癌組織中異常錶達.本研究擬探討HGF在卵巢癌的侵襲中的作用、可能機製及其信號轉導途徑.方法:Boyden小室體外侵襲實驗檢測HGF對卵巢癌SKOV3細胞穿透人工重組基底膜能力的影響;應用熒光實時定量逆轉錄聚閤酶鏈反應(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real time RT-PCR)、Western blot和流式細胞術檢測HGF和覈轉錄因子(nuclear factor κB,NFκB)抑製劑吡咯醛二硫氨基甲痠(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)作用前後SKOV3細胞c-met、明膠酶B(gelatinase B,MMP-9)mRNA和蛋白錶達的變化;採用免疫細胞化學方法和Western blot檢測HGF對SKOV3細胞覈NFκB蛋白的影響.結果:(1)HGF作用後,SKOV3細胞侵入基底膜的細胞數為343±13,較對照組(167±11)明顯升高(P＜0.01),而PDTC可以減弱HGF的促進作用(241±10,P＜0.01).(2)HGF作用後,SKOV3細胞MMP-9 mRNA水平升高(5.66±0.10)倍(P＜0.01),而經PDTC處理後隻升高(2.75±0.80)倍(P＜0.01),c-met mRNA無變化.(3)HGF作用後,SKOV3細胞c-met、MMP-9蛋白暘性率為(96.6±2.0)%和(74.6±4.4)%,較對照組(73.3±2.4)%和(16.0±2.9)%顯著增高(P＜0.01),c-met、MMP-9蛋白錶達彊度分彆為2.84±0.18和2.94±0.13,較對照組1.65±0.19和0.54±0.18顯著增高(P＜0.01).(4)PDTC可顯著抑製HGF對SKOV3細胞蛋白錶達的促進作用,MMP-9蛋白暘性率和蛋白錶達彊度分彆為(25.8±3.7)%和0.87±0.14,與對照組和HGF組的差異有顯著性(P＜0.05);對c-met蛋白錶達無影響(P＞0.05).(5)HGF作用後細胞覈NFκB蛋白錶達隨時間延長而增加,于1 h達高峰,錶達彊度為1.16±0.21,較無HGF作用的0.42±0.11明顯升高(P＜0.01),PDTC可顯著抑製HGF對NFκB的活化作用,使NFκB的錶達彊度降為0.38±0.12(P＜0.01).結論:HGF促進SKOV3細胞的侵襲作用,其機製可能為HGF通過c-met調控NFκB的活化,間接激活MMP-9的基因,促進MMP-9蛋白的閤成.
배경여목적:간세포생장인자(hepatocyte growth factor,HGF)여기수체c-met특이성결합,격활다조신호전도통로,재조절종류침습、전이화혈관형성중기중요작용.HGF화c-met재란소암조직중이상표체.본연구의탐토HGF재란소암적침습중적작용、가능궤제급기신호전도도경.방법:Boyden소실체외침습실험검측HGF대란소암SKOV3세포천투인공중조기저막능력적영향;응용형광실시정량역전록취합매련반응(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real time RT-PCR)、Western blot화류식세포술검측HGF화핵전록인자(nuclear factor κB,NFκB)억제제필각철이류안기갑산(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)작용전후SKOV3세포c-met、명효매B(gelatinase B,MMP-9)mRNA화단백표체적변화;채용면역세포화학방법화Western blot검측HGF대SKOV3세포핵NFκB단백적영향.결과:(1)HGF작용후,SKOV3세포침입기저막적세포수위343±13,교대조조(167±11)명현승고(P＜0.01),이PDTC가이감약HGF적촉진작용(241±10,P＜0.01).(2)HGF작용후,SKOV3세포MMP-9 mRNA수평승고(5.66±0.10)배(P＜0.01),이경PDTC처리후지승고(2.75±0.80)배(P＜0.01),c-met mRNA무변화.(3)HGF작용후,SKOV3세포c-met、MMP-9단백양성솔위(96.6±2.0)%화(74.6±4.4)%,교대조조(73.3±2.4)%화(16.0±2.9)%현저증고(P＜0.01),c-met、MMP-9단백표체강도분별위2.84±0.18화2.94±0.13,교대조조1.65±0.19화0.54±0.18현저증고(P＜0.01).(4)PDTC가현저억제HGF대SKOV3세포단백표체적촉진작용,MMP-9단백양성솔화단백표체강도분별위(25.8±3.7)%화0.87±0.14,여대조조화HGF조적차이유현저성(P＜0.05);대c-met단백표체무영향(P＞0.05).(5)HGF작용후세포핵NFκB단백표체수시간연장이증가,우1 h체고봉,표체강도위1.16±0.21,교무HGF작용적0.42±0.11명현승고(P＜0.01),PDTC가현저억제HGF대NFκB적활화작용,사NFκB적표체강도강위0.38±0.12(P＜0.01).결론:HGF촉진SKOV3세포적침습작용,기궤제가능위HGF통과c-met조공NFκB적활화,간접격활MMP-9적기인,촉진MMP-9단백적합성.
