广东林业科技
廣東林業科技
엄동임업과기
FORESTRY SCIENCE AND TECHNOLOGY OF GUANGDONG PROVINCE
2008年
6期
15-19
,共5页
湿加松%SSR%体系优化
濕加鬆%SSR%體繫優化
습가송%SSR%체계우화
对湿加松SSR反应体系中模板DNA的用量、Mg2+浓度、dNTPs及Taq酶的用量、变性温度、退火温度、反应循环次数共7个影响SSR扩增效果的因素,逐一设置单因素多水平进行试验,以目测比较确定谱带条数、亮度、清晰度、背景透明度以及结果的重复性等为判定反应条件适合程度的指标,其反应体系为25μL,扩增程序经优化后确定为:10 ng的模板、1×PCR缓冲液、2.5 mM的Mg2+、0.2 mM dNTPs、0.6 U Taq酶、正反向引物各0.2 μM;最优反应程序为94℃预变性2 min之后进入循环,每个循环94℃变性45 s,退火45 s,72℃延伸45 s.退火温度从Tm开始,每隔2个循环降低1℃,直至(Tm-10℃),维持40个循环.循环结束,72℃延伸5 min.
對濕加鬆SSR反應體繫中模闆DNA的用量、Mg2+濃度、dNTPs及Taq酶的用量、變性溫度、退火溫度、反應循環次數共7箇影響SSR擴增效果的因素,逐一設置單因素多水平進行試驗,以目測比較確定譜帶條數、亮度、清晰度、揹景透明度以及結果的重複性等為判定反應條件適閤程度的指標,其反應體繫為25μL,擴增程序經優化後確定為:10 ng的模闆、1×PCR緩遲液、2.5 mM的Mg2+、0.2 mM dNTPs、0.6 U Taq酶、正反嚮引物各0.2 μM;最優反應程序為94℃預變性2 min之後進入循環,每箇循環94℃變性45 s,退火45 s,72℃延伸45 s.退火溫度從Tm開始,每隔2箇循環降低1℃,直至(Tm-10℃),維持40箇循環.循環結束,72℃延伸5 min.
대습가송SSR반응체계중모판DNA적용량、Mg2+농도、dNTPs급Taq매적용량、변성온도、퇴화온도、반응순배차수공7개영향SSR확증효과적인소,축일설치단인소다수평진행시험,이목측비교학정보대조수、량도、청석도、배경투명도이급결과적중복성등위판정반응조건괄합정도적지표,기반응체계위25μL,확증정서경우화후학정위:10 ng적모판、1×PCR완충액、2.5 mM적Mg2+、0.2 mM dNTPs、0.6 U Taq매、정반향인물각0.2 μM;최우반응정서위94℃예변성2 min지후진입순배,매개순배94℃변성45 s,퇴화45 s,72℃연신45 s.퇴화온도종Tm개시,매격2개순배강저1℃,직지(Tm-10℃),유지40개순배.순배결속,72℃연신5 min.
