水生生物学报
水生生物學報
수생생물학보
ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA
2009年
1期
103-112
,共10页
中肋骨条藻%生长率%荧光定量PCR%PCNA%Cyt b
中肋骨條藻%生長率%熒光定量PCR%PCNA%Cyt b
중륵골조조%생장솔%형광정량PCR%PCNA%Cyt b
对中国近海常见的赤潮藻-中肋骨条藻(Skeletonema costatum)生长相关的分子标记进行了研究,通过RT-PCR和RACE技术获得了其PCNA基因的部分序列,首次克隆测序得到了714bP的中肋骨条藻细胞色素b(Cytochrome6,Cyt 6)基因序列.根据得到的PCNA与Cyt b基因序列,分别建立了检测中肋骨条藻PCNA与Cyt b基因的实时荧光定量PCR的标准曲线,并通过对已知浓度样品的检测证明了所建立标准曲线的准确性.以上述建立的方法为基础,研究了中肋骨条藻生长率与增殖细胞核抗原基因表达量之间的关系.结果发现,平均单细胞中PCNA表达量在培养的不同阶段变化很大,且变化趋势与生长率表现出良好的一致性,说明PCNA表达量与细胞分裂密切相关,体现了其作为细胞增殖指标的潜能;而Cyt b基因表达稳定,表达量变化很小,说明Cyt b基因是一个潜在的良好的内参基因.基于此,提出以PCNA为目的基因、Cyt b为内参基因,将PCNA基因的相对表达量(REQ)作为中肋骨条藻生长率的一个指标,并建立了实验室条件下PCNA相对表达量与中肋骨条藻生长率之间的关系式.
對中國近海常見的赤潮藻-中肋骨條藻(Skeletonema costatum)生長相關的分子標記進行瞭研究,通過RT-PCR和RACE技術穫得瞭其PCNA基因的部分序列,首次剋隆測序得到瞭714bP的中肋骨條藻細胞色素b(Cytochrome6,Cyt 6)基因序列.根據得到的PCNA與Cyt b基因序列,分彆建立瞭檢測中肋骨條藻PCNA與Cyt b基因的實時熒光定量PCR的標準麯線,併通過對已知濃度樣品的檢測證明瞭所建立標準麯線的準確性.以上述建立的方法為基礎,研究瞭中肋骨條藻生長率與增殖細胞覈抗原基因錶達量之間的關繫.結果髮現,平均單細胞中PCNA錶達量在培養的不同階段變化很大,且變化趨勢與生長率錶現齣良好的一緻性,說明PCNA錶達量與細胞分裂密切相關,體現瞭其作為細胞增殖指標的潛能;而Cyt b基因錶達穩定,錶達量變化很小,說明Cyt b基因是一箇潛在的良好的內參基因.基于此,提齣以PCNA為目的基因、Cyt b為內參基因,將PCNA基因的相對錶達量(REQ)作為中肋骨條藻生長率的一箇指標,併建立瞭實驗室條件下PCNA相對錶達量與中肋骨條藻生長率之間的關繫式.
대중국근해상견적적조조-중륵골조조(Skeletonema costatum)생장상관적분자표기진행료연구,통과RT-PCR화RACE기술획득료기PCNA기인적부분서렬,수차극륭측서득도료714bP적중륵골조조세포색소b(Cytochrome6,Cyt 6)기인서렬.근거득도적PCNA여Cyt b기인서렬,분별건립료검측중륵골조조PCNA여Cyt b기인적실시형광정량PCR적표준곡선,병통과대이지농도양품적검측증명료소건립표준곡선적준학성.이상술건립적방법위기출,연구료중륵골조조생장솔여증식세포핵항원기인표체량지간적관계.결과발현,평균단세포중PCNA표체량재배양적불동계단변화흔대,차변화추세여생장솔표현출량호적일치성,설명PCNA표체량여세포분렬밀절상관,체현료기작위세포증식지표적잠능;이Cyt b기인표체은정,표체량변화흔소,설명Cyt b기인시일개잠재적량호적내삼기인.기우차,제출이PCNA위목적기인、Cyt b위내삼기인,장PCNA기인적상대표체량(REQ)작위중륵골조조생장솔적일개지표,병건립료실험실조건하PCNA상대표체량여중륵골조조생장솔지간적관계식.
