CAJ | 학술논문

本研究观察小发夹RNA对白血病细胞血管内皮生长因子受体flt-1基因表达的抑制作用并探讨其对白血病细胞侵袭能力的影响及作用机制.采用脂质体介导的方法将构建的人fit-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入K562细胞,用G418抗性筛选获得阳性克隆:抽提基因组DNA,用PCR方法验证shRNA基因对K562细胞的转染;以RT-PCR和免疫印迹反应检测flt-1 mRNA和蛋白表达量的变化;用Boyden小室体外侵袭实验检测白血病细胞的侵袭能力;RT-PCR方法检测白血病细胞MMP-2和MMP-9的表达.结果表明,flt-1基因特异性shRNA真核表达载体转染入白血病细胞株K562,G418筛选2周获得阳性克隆;PCR检测证实shRNA基因整合入白血病细胞基因DNA;携有shRNA的flt-1基因能明显下调白血病细胞内flt-1基因mRNA表达水平;设计的2种不同flt-1shRNA序列能不同程度干扰flt-1基因和蛋白在细胞中的表达,两组阳性细胞中flt-1基因表达抑制率分别为46.1%和65.4%;flt-1 shRNA转染白血病细胞系K562细胞后,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均较转染前明显下降;阳性细胞穿透人工重组基底膜的能力(4.3±1.2)%较对照组(12.7±1.9)%及(9.6±1.7)%明显降低(p＜0.01).结论:VEGF受体flt-1特异性shRNA的真核表达载体能够高效转柒入白血病细胞株K562,有效抑制flt-1基因的表达,并使白血病细胞体外侵袭能力减弱,MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平下降.这提示VEGF可能通过与其受体结合调控MMP-2和MMP-9的方式,参与白血病细胞的转移.
본연구관찰소발협RNA대백혈병세포혈관내피생장인자수체flt-1기인표체적억제작용병탐토기대백혈병세포침습능력적영향급작용궤제.채용지질체개도적방법장구건적인fit-1기인특이성shRNA진핵표체재체전염입K562세포,용G418항성사선획득양성극륭:추제기인조DNA,용PCR방법험증shRNA기인대K562세포적전염;이RT-PCR화면역인적반응검측flt-1 mRNA화단백표체량적변화;용Boyden소실체외침습실험검측백혈병세포적침습능력;RT-PCR방법검측백혈병세포MMP-2화MMP-9적표체.결과표명,flt-1기인특이성shRNA진핵표체재체전염입백혈병세포주K562,G418사선2주획득양성극륭;PCR검측증실shRNA기인정합입백혈병세포기인DNA;휴유shRNA적flt-1기인능명현하조백혈병세포내flt-1기인mRNA표체수평;설계적2충불동flt-1shRNA서렬능불동정도간우flt-1기인화단백재세포중적표체,량조양성세포중flt-1기인표체억제솔분별위46.1%화65.4%;flt-1 shRNA전염백혈병세포계K562세포후,MMP-2화MMP-9 mRNA표체수평균교전염전명현하강;양성세포천투인공중조기저막적능력(4.3±1.2)%교대조조(12.7±1.9)%급(9.6±1.7)%명현강저(p＜0.01).결론:VEGF수체flt-1특이성shRNA적진핵표체재체능구고효전칠입백혈병세포주K562,유효억제flt-1기인적표체,병사백혈병세포체외침습능력감약,MMP-2화MMP-9 mRNA표체수평하강.저제시VEGF가능통과여기수체결합조공MMP-2화MMP-9적방식,삼여백혈병세포적전이.