广西医科大学学报
廣西醫科大學學報
엄서의과대학학보
JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY
2011年
3期
338-341
,共4页
王桂玲%张洁清%林小钰%宋红林%李力
王桂玲%張潔清%林小鈺%宋紅林%李力
왕계령%장길청%림소옥%송홍림%리력
WWOX%慢病毒载体%卵巢癌
WWOX%慢病毒載體%卵巢癌
WWOX%만병독재체%란소암
目的:构建及鉴定WWOX基因慢病毒载体,观察WWOX基因在人卵巢癌PEO1细胞株中的表达,为进一步研究WWOX基因的作用机制及其功能奠定基础.方法:采用PCR技术从克隆质粒模板中获得全长WWOX基因,将WWOX基因 亚克隆到慢病毒载体PCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP中,构建慢病毒载体表达质粒PCDH-WWOX,通过双酶切验证后,慢病毒表达质粒与慢病毒包装质粒pPACKHl-GAG,pPACKH1-REV,Pvsv-G共转染293T细胞,获得携带WWOX基因及EGFP基因的重组慢病毒Lenti WWOX,并转染靶细胞人卵巢癌PEO1细胞株.通过RT-PCR和Western Blot验证Lenti WWOX在PEO1细胞株中的表达.结果:测序结果显示成功构建重组慢病毒载体表达质粒PCDH-WWOX;表达质粒与辅助包装质粒共转染包装细胞293T后能产生慢病毒颗粒并能有效感染靶细胞PEO1,转导效率约为60%,有WWOX基因mRNA和蛋白水平的高表达.结论:本实验成功构建了携带WWOX基因慢病毒表达载体,包装成病毒后能有效感染卵巢癌PEO1细胞.
目的:構建及鑒定WWOX基因慢病毒載體,觀察WWOX基因在人卵巢癌PEO1細胞株中的錶達,為進一步研究WWOX基因的作用機製及其功能奠定基礎.方法:採用PCR技術從剋隆質粒模闆中穫得全長WWOX基因,將WWOX基因 亞剋隆到慢病毒載體PCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP中,構建慢病毒載體錶達質粒PCDH-WWOX,通過雙酶切驗證後,慢病毒錶達質粒與慢病毒包裝質粒pPACKHl-GAG,pPACKH1-REV,Pvsv-G共轉染293T細胞,穫得攜帶WWOX基因及EGFP基因的重組慢病毒Lenti WWOX,併轉染靶細胞人卵巢癌PEO1細胞株.通過RT-PCR和Western Blot驗證Lenti WWOX在PEO1細胞株中的錶達.結果:測序結果顯示成功構建重組慢病毒載體錶達質粒PCDH-WWOX;錶達質粒與輔助包裝質粒共轉染包裝細胞293T後能產生慢病毒顆粒併能有效感染靶細胞PEO1,轉導效率約為60%,有WWOX基因mRNA和蛋白水平的高錶達.結論:本實驗成功構建瞭攜帶WWOX基因慢病毒錶達載體,包裝成病毒後能有效感染卵巢癌PEO1細胞.
목적:구건급감정WWOX기인만병독재체,관찰WWOX기인재인란소암PEO1세포주중적표체,위진일보연구WWOX기인적작용궤제급기공능전정기출.방법:채용PCR기술종극륭질립모판중획득전장WWOX기인,장WWOX기인 아극륭도만병독재체PCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP중,구건만병독재체표체질립PCDH-WWOX,통과쌍매절험증후,만병독표체질립여만병독포장질립pPACKHl-GAG,pPACKH1-REV,Pvsv-G공전염293T세포,획득휴대WWOX기인급EGFP기인적중조만병독Lenti WWOX,병전염파세포인란소암PEO1세포주.통과RT-PCR화Western Blot험증Lenti WWOX재PEO1세포주중적표체.결과:측서결과현시성공구건중조만병독재체표체질립PCDH-WWOX;표체질립여보조포장질립공전염포장세포293T후능산생만병독과립병능유효감염파세포PEO1,전도효솔약위60%,유WWOX기인mRNA화단백수평적고표체.결론:본실험성공구건료휴대WWOX기인만병독표체재체,포장성병독후능유효감염란소암PEO1세포.
