三种方法转染Math1基因效率和细胞毒性研究
삼충방법전염Math1기인효솔화세포독성연구
Math1-EGFP gene transfection and cytotoxicity to 293T Cells by different vectors
  • 万方数据
    中华耳科学杂志 중화이과학잡지
    CHINESE JOURNAL OF OTOLOGY
    2011年 1期 92-96 ,共5页

    陈志婷%杨仕明%吴南%郭维维%赵立东%刘会占%舒卫宁%任丽丽%王琳%李新新%张小兵

    진지정%양사명%오남%곽유유%조립동%류회점%서위저%임려려%왕림%리신신%장소병

    Math1%基因转染%基因载体%纳米材料 Math1%基因轉染%基因載體%納米材料
    Math1%기인전염%기인재체%납미재료
    目的 比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体体外携带目的 基因Math1对HEK293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,以期筛选理想的基因转染载体材料.方法 选用重组腺病毒、LipofectamineTM 2000、Superfect纳米材料作为转染载体,携带含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因的Math1-EGFP基因及真核表达质粒pRK5-Math1-EGFP,并且根据不同转染载体说明步骤优化体外转染条件,分别转染293T细胞.在一定的时间内利用荧光显微镜观察细胞转染结果并计数阳性细胞,采用MTT(噻唑蓝)法检测三种不同载体体外细胞毒性,应用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)技术检测转染阳性细胞中目的 基因Math1的mRNA表达情况.结果 在优化的体外转染条件下,重组腺病毒载体介导的细胞转染率达到了94％以上,脂质体和商品化Supeffect纳米材料转染的细胞中,荧光蛋白表达率分别为73％和80％以上,同时,商品化Superfect纳米材料在达到80％转染率的条件下,细胞存活率为90％.应用RT-PCR方法 证实,三种载体转染细胞均有Math1基因的mRNA的表达.结论 商品化Supeffect纳米材料作为一种新型的、安全有效的纳米转染材料,能够成功携带耳聋治疗关键基因Math1转染293T细胞,以期在内耳基因治疗的研究当中得到有效的应用.
    목적 비교선병독、지질체、납미재료삼충불동류형적재체체외휴대목적 기인Math1대HEK293T세포적전염효솔급세포독성적대소,이기사선이상적기인전염재체재료.방법 선용중조선병독、LipofectamineTM 2000、Superfect납미재료작위전염재체,휴대함유증강형록색형광단백(enhanced green fluorescent protein,EGFP)보고기인적Math1-EGFP기인급진핵표체질립pRK5-Math1-EGFP,병차근거불동전염재체설명보취우화체외전염조건,분별전염293T세포.재일정적시간내이용형광현미경관찰세포전염결과병계수양성세포,채용MTT(새서람)법검측삼충불동재체체외세포독성,응용RT-PCR(역전록취합매련반응)기술검측전염양성세포중목적 기인Math1적mRNA표체정황.결과 재우화적체외전염조건하,중조선병독재체개도적세포전염솔체도료94％이상,지질체화상품화Supeffect납미재료전염적세포중,형광단백표체솔분별위73％화80％이상,동시,상품화Superfect납미재료재체도80％전염솔적조건하,세포존활솔위90％.응용RT-PCR방법 증실,삼충재체전염세포균유Math1기인적mRNA적표체.결론 상품화Supeffect납미재료작위일충신형적、안전유효적납미전염재료,능구성공휴대이롱치료관건기인Math1전염293T세포,이기재내이기인치료적연구당중득도유효적응용.
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