CAJ | 학술논문

目的:探讨PI3K信号通路对哮喘小鼠T细胞中辅助性T细胞17(Th17)与CD4+CD 25+调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用.方法:尼龙毛柱法分选对照组和哮喘组BALB/c小鼠脾脏T细胞,进而在细胞水平分组:对照组(A组)分为2个亚组:空白对照组(A1),PI3K抑制剂LY294002对照组(A2);哮喘组(B组)继续分为4个亚组:哮喘组(B1),5 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B2),10 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B3),20 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B4),共培养72 h,采用流式细胞仪检测CD4+CD 25+Treg的数量,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清中白细胞介素(IL)-10和IL-17水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转录因子Foxp3和RORγt的mRNA水平.结果:(1)分选后获得的T细胞纯度为(74.12±3.08)%,细胞存活率为(92.82±3.21)%;(2)Treg的数量B1组较A1组显著降低(P<0.01);A2组显著高于A1组(P<0.05);B3和B4组较B1组显著增高(均P<0.01);(3)IL-17水平和RORγt mRNA表达B1组较A1组显著增高(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01,P<0.05);B2、B3、B4组均显著低于B1组(均P<0.01),呈剂量依赖性降低;而IL-10水平和Foxp3 mRNA表达B1组显著低于A1组(P<0.01);A2组显著高于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组均显著高于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性增高;(4)RORγt/Foxp3 mRNA的比值B1组显著高于A1组(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组显著低于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性降低;RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-17水平呈正相关(r=0.89,P<0.01);RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-10呈负相关(r=-0.86,P<0.01).结论:哮喘小鼠存在Th17/Treg失衡,PI3K信号通过调控Treg/Th17失衡而参与哮喘发病过程.
목적:탐토PI3K신호통로대효천소서T세포중보조성T세포17(Th17)여CD4+CD 25+조절성T세포(Treg)실형적조공작용.방법:니룡모주법분선대조조화효천조BALB/c소서비장T세포,진이재세포수평분조:대조조(A조)분위2개아조:공백대조조(A1),PI3K억제제LY294002대조조(A2);효천조(B조)계속분위4개아조:효천조(B1),5 μmol/L PI3K억제제LY294002조(B2),10 μmol/L PI3K억제제LY294002조(B3),20 μmol/L PI3K억제제LY294002조(B4),공배양72 h,채용류식세포의검측CD4+CD 25+Treg적수량,매련면역흡부반응(ELISA)검측상청중백세포개소(IL)-10화IL-17수평,역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측전록인자Foxp3화RORγt적mRNA수평.결과:(1)분선후획득적T세포순도위(74.12±3.08)%,세포존활솔위(92.82±3.21)%;(2)Treg적수량B1조교A1조현저강저(P<0.01);A2조현저고우A1조(P<0.05);B3화B4조교B1조현저증고(균P<0.01);(3)IL-17수평화RORγt mRNA표체B1조교A1조현저증고(P<0.01);A2조현저저우A1조(P<0.01,P<0.05);B2、B3、B4조균현저저우B1조(균P<0.01),정제량의뢰성강저;이IL-10수평화Foxp3 mRNA표체B1조현저저우A1조(P<0.01);A2조현저고우A1조(P<0.01);B2、B3화B4조균현저고우B1조(P<0.01),차정농도의뢰성증고;(4)RORγt/Foxp3 mRNA적비치B1조현저고우A1조(P<0.01);A2조현저저우A1조(P<0.01);B2、B3화B4조현저저우B1조(P<0.01),차정농도의뢰성강저;RORγt/Foxp3 mRNA비치여IL-17수평정정상관(r=0.89,P<0.01);RORγt/Foxp3 mRNA비치여IL-10정부상관(r=-0.86,P<0.01).결론:효천소서존재Th17/Treg실형,PI3K신호통과조공Treg/Th17실형이삼여효천발병과정.