安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2012年
3期
279-282
,共4页
刘君%耿慧武%陈应炉%刘晓颖%范礼斌
劉君%耿慧武%陳應爐%劉曉穎%範禮斌
류군%경혜무%진응로%류효영%범례빈
基因表达%转染%COX6B1%细胞定位
基因錶達%轉染%COX6B1%細胞定位
기인표체%전염%COX6B1%세포정위
目的 构建带FLAG标签的人野生型细胞色素氧化酶亚基COX6B1表达载体,转染至HEK 293T、COS7细胞观察COX6B1蛋白在细胞内表达与定位.方法 以含人COX6B1全长cDNA序列的质粒为模板,通过上游带有FLAG标签的引物,PCR方法扩增出COX6B1全长序列,然后插入真核表达载体pCDNA3.1中构建pCDNA3.1-FLAG-COX6B1表达载体.将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位.结果 成功构建了pCDNA3.1-FLAG-COX6B1表达载体,其在HEK 293T细胞中能有效地表达;在COS7细胞中呈斑点状分布,且主要在胞质内分布,细胞核中未见其明显表达.结论 COX6B1在HEK 293T、COS7细胞中均有表达,且主要分布在胞质内,这为进一步了解COX6B1的功能提供了一定的基础.
目的 構建帶FLAG標籤的人野生型細胞色素氧化酶亞基COX6B1錶達載體,轉染至HEK 293T、COS7細胞觀察COX6B1蛋白在細胞內錶達與定位.方法 以含人COX6B1全長cDNA序列的質粒為模闆,通過上遊帶有FLAG標籤的引物,PCR方法擴增齣COX6B1全長序列,然後插入真覈錶達載體pCDNA3.1中構建pCDNA3.1-FLAG-COX6B1錶達載體.將構建的質粒轉染至HEK 293T細胞,提取總蛋白,進行Western blot檢測;轉染至COS7細胞,在熒光顯微鏡下觀察其細胞定位.結果 成功構建瞭pCDNA3.1-FLAG-COX6B1錶達載體,其在HEK 293T細胞中能有效地錶達;在COS7細胞中呈斑點狀分佈,且主要在胞質內分佈,細胞覈中未見其明顯錶達.結論 COX6B1在HEK 293T、COS7細胞中均有錶達,且主要分佈在胞質內,這為進一步瞭解COX6B1的功能提供瞭一定的基礎.
목적 구건대FLAG표첨적인야생형세포색소양화매아기COX6B1표체재체,전염지HEK 293T、COS7세포관찰COX6B1단백재세포내표체여정위.방법 이함인COX6B1전장cDNA서렬적질립위모판,통과상유대유FLAG표첨적인물,PCR방법확증출COX6B1전장서렬,연후삽입진핵표체재체pCDNA3.1중구건pCDNA3.1-FLAG-COX6B1표체재체.장구건적질립전염지HEK 293T세포,제취총단백,진행Western blot검측;전염지COS7세포,재형광현미경하관찰기세포정위.결과 성공구건료pCDNA3.1-FLAG-COX6B1표체재체,기재HEK 293T세포중능유효지표체;재COS7세포중정반점상분포,차주요재포질내분포,세포핵중미견기명현표체.결론 COX6B1재HEK 293T、COS7세포중균유표체,차주요분포재포질내,저위진일보료해COX6B1적공능제공료일정적기출.
