东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2012年
2期
162-165
,共4页
沈涛%杨礼庆%李妍%许晓军%梁爽%巴根%付勤
瀋濤%楊禮慶%李妍%許曉軍%樑爽%巴根%付勤
침도%양례경%리연%허효군%량상%파근%부근
人Polo样激酶2%Western blot%绿色荧光蛋白%质粒构建
人Polo樣激酶2%Western blot%綠色熒光蛋白%質粒構建
인Polo양격매2%Western blot%록색형광단백%질립구건
目的:构建人Polo样激酶2(hPlk2)真核表达载体并证实该融合蛋白在细胞内的表达及定位.方法:提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA.PCR扩增hPlk2基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中.然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.最后利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hPlk2在COS-7细胞内的定位.结果:hPlk2基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为2058bp,并测序成功.Western blot检测到了pEGFP-hPlk2融合蛋白表达,分子量约为105kDa.pEGFP-hPlk2在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周.结论:成功构建了hPlk2基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk2蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周.
目的:構建人Polo樣激酶2(hPlk2)真覈錶達載體併證實該融閤蛋白在細胞內的錶達及定位.方法:提取工具細胞Hela的mRNA,反轉錄為cDNA.PCR擴增hPlk2基因cDNA全長,併將其亞剋隆至pEGFP-C1錶達載體中.然後將構建的重組質粒進行酶切和測序鑒定,併轉染到工具細胞COS-7中,提取細胞蛋白進行Western blot檢測.最後利用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察pEGFP-hPlk2在COS-7細胞內的定位.結果:hPlk2基因cDNA全長剋隆到瞭真覈錶達載體pEGFP-C1中,酶切鑒定片段大小為2058bp,併測序成功.Western blot檢測到瞭pEGFP-hPlk2融閤蛋白錶達,分子量約為105kDa.pEGFP-hPlk2在COS-7細胞中主要定位于細胞質和覈週.結論:成功構建瞭hPlk2基因cDNA全長的真覈錶達載體,pEGFP-hPlk2蛋白在COS-7細胞中主要定位于細胞質和覈週.
목적:구건인Polo양격매2(hPlk2)진핵표체재체병증실해융합단백재세포내적표체급정위.방법:제취공구세포Hela적mRNA,반전록위cDNA.PCR확증hPlk2기인cDNA전장,병장기아극륭지pEGFP-C1표체재체중.연후장구건적중조질립진행매절화측서감정,병전염도공구세포COS-7중,제취세포단백진행Western blot검측.최후이용격광소묘공취초현미경관찰pEGFP-hPlk2재COS-7세포내적정위.결과:hPlk2기인cDNA전장극륭도료진핵표체재체pEGFP-C1중,매절감정편단대소위2058bp,병측서성공.Western blot검측도료pEGFP-hPlk2융합단백표체,분자량약위105kDa.pEGFP-hPlk2재COS-7세포중주요정위우세포질화핵주.결론:성공구건료hPlk2기인cDNA전장적진핵표체재체,pEGFP-hPlk2단백재COS-7세포중주요정위우세포질화핵주.
