中国组织工程研究
中國組織工程研究
중국조직공정연구
Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research
2012年
24期
4486-4490
,共5页
叶文静%韩纪举%赵晓民%夏作理
葉文靜%韓紀舉%趙曉民%夏作理
협문정%한기거%조효민%하작리
总RNA提取%胃癌%实时反转录-聚合酶链反应%异硫氰酸胍%Trizol%硅胶柱
總RNA提取%胃癌%實時反轉錄-聚閤酶鏈反應%異硫氰痠胍%Trizol%硅膠柱
총RNA제취%위암%실시반전록-취합매련반응%이류청산고%Trizol%규효주
背景:目前两种最可靠、应用最广的高通量RNA分离技术是基于异硫氰酸胍-酚︰氯仿的RNA分离技术和基于硅胶柱的RNA分离技术.在临床应用非常有限的组织材料时,有必要对RNA分离技术的可重复性和可靠性分别进行先期评价.目的:系统比较采用硅胶柱法和Trizol法从冻存、新鲜胃癌组织中分离总RNA的效果.方法:硅胶柱法和Trizol法分别提取长期-80 ℃冻存的(2年以上)和新鲜胃癌组织总RNA,紫外分光光度法比较RNA纯度,琼脂糖凝胶电泳分析28 S和18 S吸光度比值,进一步通过实时反转录-聚合酶链反应对扩增距mRNA polyA尾端不同大小片段的Ct值进行比较,间接判断不同大小mRNA的拷贝数及完整性.结果与结论:硅胶柱技术和Trizol方法在总RNA提取的纯度方面都表现很好.然而在RNA完整性方面,基于硅胶柱技术的提取方法要好于Trizol法,因为其核糖体RNA形式完好而且更好地保持了不仅短的及中等大小片段,对于较大的mRNA片段也保持更好.另外,与新鲜组织相比,长时间冻存对胃癌组织总RNA提取的影响很小.
揹景:目前兩種最可靠、應用最廣的高通量RNA分離技術是基于異硫氰痠胍-酚︰氯倣的RNA分離技術和基于硅膠柱的RNA分離技術.在臨床應用非常有限的組織材料時,有必要對RNA分離技術的可重複性和可靠性分彆進行先期評價.目的:繫統比較採用硅膠柱法和Trizol法從凍存、新鮮胃癌組織中分離總RNA的效果.方法:硅膠柱法和Trizol法分彆提取長期-80 ℃凍存的(2年以上)和新鮮胃癌組織總RNA,紫外分光光度法比較RNA純度,瓊脂糖凝膠電泳分析28 S和18 S吸光度比值,進一步通過實時反轉錄-聚閤酶鏈反應對擴增距mRNA polyA尾耑不同大小片段的Ct值進行比較,間接判斷不同大小mRNA的拷貝數及完整性.結果與結論:硅膠柱技術和Trizol方法在總RNA提取的純度方麵都錶現很好.然而在RNA完整性方麵,基于硅膠柱技術的提取方法要好于Trizol法,因為其覈糖體RNA形式完好而且更好地保持瞭不僅短的及中等大小片段,對于較大的mRNA片段也保持更好.另外,與新鮮組織相比,長時間凍存對胃癌組織總RNA提取的影響很小.
배경:목전량충최가고、응용최엄적고통량RNA분리기술시기우이류청산고-분︰록방적RNA분리기술화기우규효주적RNA분리기술.재림상응용비상유한적조직재료시,유필요대RNA분리기술적가중복성화가고성분별진행선기평개.목적:계통비교채용규효주법화Trizol법종동존、신선위암조직중분리총RNA적효과.방법:규효주법화Trizol법분별제취장기-80 ℃동존적(2년이상)화신선위암조직총RNA,자외분광광도법비교RNA순도,경지당응효전영분석28 S화18 S흡광도비치,진일보통과실시반전록-취합매련반응대확증거mRNA polyA미단불동대소편단적Ct치진행비교,간접판단불동대소mRNA적고패수급완정성.결과여결론:규효주기술화Trizol방법재총RNA제취적순도방면도표현흔호.연이재RNA완정성방면,기우규효주기술적제취방법요호우Trizol법,인위기핵당체RNA형식완호이차경호지보지료불부단적급중등대소편단,대우교대적mRNA편단야보지경호.령외,여신선조직상비,장시간동존대위암조직총RNA제취적영향흔소.
