中华胰腺病杂志
中華胰腺病雜誌
중화이선병잡지
CHINESE JOURNAL OF PANCREATOLOGY
2008年
1期
44-46
,共3页
时纪元%李兆中%高军%龚燕芳%金晶
時紀元%李兆中%高軍%龔燕芳%金晶
시기원%리조중%고군%공연방%금정
质粒%DNA,重组%毕赤酵母%聚合酶链反应
質粒%DNA,重組%畢赤酵母%聚閤酶鏈反應
질립%DNA,중조%필적효모%취합매련반응
目的 构建含Sonic hedgehog(SHH)蛋白N端基因片段的毕赤酵母表达载体.方法 通过BamH 1、Xho 1双酶切、T4连接酶连接,将SHH-N基因片段插入pET22b原核表达载体,构建pET22b-SHH-N质粒;经PCR扩增,产物再与pTA2载体连接,构建pTA2-SHH-N重组质粒;经EcoR 1及Not 1双酶切、T4连接酶连接,将SHH-N端基因片段插入pPIC9K质粒,构建pPIC9K-SHH-N重组质粒;通过线性化、脱磷酸化,将线性化pPIC9 K-SHH-N DNA转染毕赤酵母菌株GS115,最后经PCR扩增和测序鉴定.结果 转染的毕赤酵母经PCR扩增和测序证实含有SHH-N基因片段,与原始的基因片段序列完全一致.结论 成功地构建含SHH-N蛋白基因片段的毕赤酵母表达载体.
目的 構建含Sonic hedgehog(SHH)蛋白N耑基因片段的畢赤酵母錶達載體.方法 通過BamH 1、Xho 1雙酶切、T4連接酶連接,將SHH-N基因片段插入pET22b原覈錶達載體,構建pET22b-SHH-N質粒;經PCR擴增,產物再與pTA2載體連接,構建pTA2-SHH-N重組質粒;經EcoR 1及Not 1雙酶切、T4連接酶連接,將SHH-N耑基因片段插入pPIC9K質粒,構建pPIC9K-SHH-N重組質粒;通過線性化、脫燐痠化,將線性化pPIC9 K-SHH-N DNA轉染畢赤酵母菌株GS115,最後經PCR擴增和測序鑒定.結果 轉染的畢赤酵母經PCR擴增和測序證實含有SHH-N基因片段,與原始的基因片段序列完全一緻.結論 成功地構建含SHH-N蛋白基因片段的畢赤酵母錶達載體.
목적 구건함Sonic hedgehog(SHH)단백N단기인편단적필적효모표체재체.방법 통과BamH 1、Xho 1쌍매절、T4련접매련접,장SHH-N기인편단삽입pET22b원핵표체재체,구건pET22b-SHH-N질립;경PCR확증,산물재여pTA2재체련접,구건pTA2-SHH-N중조질립;경EcoR 1급Not 1쌍매절、T4련접매련접,장SHH-N단기인편단삽입pPIC9K질립,구건pPIC9K-SHH-N중조질립;통과선성화、탈린산화,장선성화pPIC9 K-SHH-N DNA전염필적효모균주GS115,최후경PCR확증화측서감정.결과 전염적필적효모경PCR확증화측서증실함유SHH-N기인편단,여원시적기인편단서렬완전일치.결론 성공지구건함SHH-N단백기인편단적필적효모표체재체.
