复旦学报(自然科学版)
複旦學報(自然科學版)
복단학보(자연과학판)
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2003年
4期
536-540
,共5页
袁汉英%艾华水%范长胜%高卜渝%黄路生%李育阳
袁漢英%艾華水%範長勝%高蔔渝%黃路生%李育暘
원한영%애화수%범장성%고복투%황로생%리육양
单链莫奈林基因%毕赤氏酵母%分泌表达
單鏈莫奈林基因%畢赤氏酵母%分泌錶達
단련막내림기인%필적씨효모%분비표체
根据甜蛋白莫奈林的氨基酸序列,选择酵母偏爱密码子,化学合成单链莫奈林(Single-Chain Monellin,SCM)基因片段,并拼接成全基因. 基因的DNA序列分析表明,合成的单链莫奈林基因与设计的一致.该基因插入于毕赤氏酵母整合型质粒pPIC9K中置于AOXI启动子的控制下,并通过电转化技术将重组质粒pPIC9K/SCM导入Pichia pastoris,在含有G418的YEPD平板上筛选整合型的多拷贝的转化子.转化子在BMMY培养基中经甲醇诱导表达,用SDS-PAGE检测发酵液,表明SCM的分泌表达蛋白可达发酵液蛋白含量的90%.
根據甜蛋白莫奈林的氨基痠序列,選擇酵母偏愛密碼子,化學閤成單鏈莫奈林(Single-Chain Monellin,SCM)基因片段,併拼接成全基因. 基因的DNA序列分析錶明,閤成的單鏈莫奈林基因與設計的一緻.該基因插入于畢赤氏酵母整閤型質粒pPIC9K中置于AOXI啟動子的控製下,併通過電轉化技術將重組質粒pPIC9K/SCM導入Pichia pastoris,在含有G418的YEPD平闆上篩選整閤型的多拷貝的轉化子.轉化子在BMMY培養基中經甲醇誘導錶達,用SDS-PAGE檢測髮酵液,錶明SCM的分泌錶達蛋白可達髮酵液蛋白含量的90%.
근거첨단백막내림적안기산서렬,선택효모편애밀마자,화학합성단련막내림(Single-Chain Monellin,SCM)기인편단,병병접성전기인. 기인적DNA서렬분석표명,합성적단련막내림기인여설계적일치.해기인삽입우필적씨효모정합형질립pPIC9K중치우AOXI계동자적공제하,병통과전전화기술장중조질립pPIC9K/SCM도입Pichia pastoris,재함유G418적YEPD평판상사선정합형적다고패적전화자.전화자재BMMY배양기중경갑순유도표체,용SDS-PAGE검측발효액,표명SCM적분비표체단백가체발효액단백함량적90%.
