CAJ | 학술논문

[目的]观察人参总皂甙(GS)对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的诱导作用.[方法]取成年SD大鼠骨髓细胞,采用密度梯度分离法与贴壁法结合获取MSCs,进行原代培养和克隆培养;采用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34和CD44以鉴定该法所获细胞是否为MSCs;对传至第8代的MSCs进行分组诱导,分别为GS组(终末浓度为250mg/L)、5-氮胞苷(5-aza)组(终末浓度为10μmol/L)、GS+5-aza组(终末浓度分别为250mg/L、10μmol/L),每组再分3个亚组,分别对MSCs进行24、48、72 h诱导,并设空白对照组;采用共聚焦荧光显微镜观察细胞数及阳性细胞数,计算心肌样细胞转化率;采用免疫组化法检测分化的心肌样细胞的特异性蛋白结蛋白(Desmin)和肌钙蛋白(cTnI),采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测诱导前后心肌细胞特征性基因α-心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β-心肌肌球蛋白重链(β-MHC)的表达.[结果]分离培养后的细胞生长密集,形态呈纺锤状,表面抗原鉴定为CD44表达阳性,表明所获细胞为MSCs;经GS、5-aza诱导后,MSCs分化成类心肌细胞,3组的心肌样细胞转化率无显著性差异(分别为38%、35%、39%);免疫组化和RT-PCR检测结果显示Desmin、cTnI和MHC表达均阳性,阳性细胞呈梭形和成纤维细胞样形态,表明MSCs在GS体外诱导下已向心肌样细胞转化,并具有心肌样细胞的特性.[结论]GS可体外诱导MSCs分化为心肌样细胞,为细胞移植治疗心肌梗死提供了实验依据.
[목적]관찰인삼총조대(GS)대골수간충질간세포(MSCs)분화위심기양세포적유도작용.[방법]취성년SD대서골수세포,채용밀도제도분리법여첩벽법결합획취MSCs,진행원대배양화극륭배양;채용류식세포의검측세포표면항원CD34화CD44이감정해법소획세포시부위MSCs;대전지제8대적MSCs진행분조유도,분별위GS조(종말농도위250mg/L)、5-담포감(5-aza)조(종말농도위10μmol/L)、GS+5-aza조(종말농도분별위250mg/L、10μmol/L),매조재분3개아조,분별대MSCs진행24、48、72 h유도,병설공백대조조;채용공취초형광현미경관찰세포수급양성세포수,계산심기양세포전화솔;채용면역조화법검측분화적심기양세포적특이성단백결단백(Desmin)화기개단백(cTnI),채용역전록취합매련반응(RT-PCR)검측유도전후심기세포특정성기인α-심기기구단백중련(α-MHC)화β-심기기구단백중련(β-MHC)적표체.[결과]분리배양후적세포생장밀집,형태정방추상,표면항원감정위CD44표체양성,표명소획세포위MSCs;경GS、5-aza유도후,MSCs분화성류심기세포,3조적심기양세포전화솔무현저성차이(분별위38%、35%、39%);면역조화화RT-PCR검측결과현시Desmin、cTnI화MHC표체균양성,양성세포정사형화성섬유세포양형태,표명MSCs재GS체외유도하이향심기양세포전화,병구유심기양세포적특성.[결론]GS가체외유도MSCs분화위심기양세포,위세포이식치료심기경사제공료실험의거.