安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2007年
23期
7105-7107
,共3页
王慧%王茂华%刘绵学%杨毅%李旭锋
王慧%王茂華%劉綿學%楊毅%李旭鋒
왕혜%왕무화%류면학%양의%리욱봉
BnKCR2基因%真核表达载体%载体构建
BnKCR2基因%真覈錶達載體%載體構建
BnKCR2기인%진핵표체재체%재체구건
[目的]为了克隆甘蓝型油菜的BnKCR2基因,并构建其真核表达载体,以期得到高芥酸含量的油菜.[方法]根据GenBank中甘蓝型油菜3-酮酯酰-CoA还原酶(BnKCR2)的cDNA序列设计引物,提取蜀杂九号油菜叶片的总RNA,进行RT-PCR扩增,将产物与TA克隆载体pMD18-T连接,通过中间载体pMD18-T和pBluescript将BnKCR2分别正向、反向导入pBI121质粒载体,构建BnKCR2基因的正向和反向表达质粒.[结果]通过甘蓝型油菜总RNA的RT-PCR扩增,成功克隆到一个960 bp的BnKCR2基因;重组质粒pMD18-BnKCR2测序结果与NCBI中甘蓝型油菜cDNA(AY196197)序列的相似性达99%;而蛋白质序列仅有1个氨基酸之差,且蛋白质天然构象未改变,BnKCR2是反向连接克隆.[结论]通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌,为通过根癌农杆菌介导法将BnKCR2基因导入油菜奠定了基础.
[目的]為瞭剋隆甘藍型油菜的BnKCR2基因,併構建其真覈錶達載體,以期得到高芥痠含量的油菜.[方法]根據GenBank中甘藍型油菜3-酮酯酰-CoA還原酶(BnKCR2)的cDNA序列設計引物,提取蜀雜九號油菜葉片的總RNA,進行RT-PCR擴增,將產物與TA剋隆載體pMD18-T連接,通過中間載體pMD18-T和pBluescript將BnKCR2分彆正嚮、反嚮導入pBI121質粒載體,構建BnKCR2基因的正嚮和反嚮錶達質粒.[結果]通過甘藍型油菜總RNA的RT-PCR擴增,成功剋隆到一箇960 bp的BnKCR2基因;重組質粒pMD18-BnKCR2測序結果與NCBI中甘藍型油菜cDNA(AY196197)序列的相似性達99%;而蛋白質序列僅有1箇氨基痠之差,且蛋白質天然構象未改變,BnKCR2是反嚮連接剋隆.[結論]通過凍融法將重組質粒導入根癌農桿菌,為通過根癌農桿菌介導法將BnKCR2基因導入油菜奠定瞭基礎.
[목적]위료극륭감람형유채적BnKCR2기인,병구건기진핵표체재체,이기득도고개산함량적유채.[방법]근거GenBank중감람형유채3-동지선-CoA환원매(BnKCR2)적cDNA서렬설계인물,제취촉잡구호유채협편적총RNA,진행RT-PCR확증,장산물여TA극륭재체pMD18-T련접,통과중간재체pMD18-T화pBluescript장BnKCR2분별정향、반향도입pBI121질립재체,구건BnKCR2기인적정향화반향표체질립.[결과]통과감람형유채총RNA적RT-PCR확증,성공극륭도일개960 bp적BnKCR2기인;중조질립pMD18-BnKCR2측서결과여NCBI중감람형유채cDNA(AY196197)서렬적상사성체99%;이단백질서렬부유1개안기산지차,차단백질천연구상미개변,BnKCR2시반향련접극륭.[결론]통과동융법장중조질립도입근암농간균,위통과근암농간균개도법장BnKCR2기인도입유채전정료기출.
