中国海洋大学学报(自然科学版)
中國海洋大學學報(自然科學版)
중국해양대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
2009年
3期
448-452
,共5页
赵丽媛%于志刚%甄毓%米铁柱
趙麗媛%于誌剛%甄毓%米鐵柱
조려원%우지강%견육%미철주
线粒体细胞色素b基因%东海原甲藻%实时荧光定量PCR%内参基因
線粒體細胞色素b基因%東海原甲藻%實時熒光定量PCR%內參基因
선립체세포색소b기인%동해원갑조%실시형광정량PCR%내삼기인
建立了检测东海原甲藻线粒体细胞色素b(Cytb)基因mRNA含量的实时荧光定量PCR方法.以甲藻Cytb基因的简并引物扩增得到984 bp长的东海原甲藻Cytb基因片段,经克隆、测序,制备并纯化质粒.以光度法测定质粒浓度并作为标准品.对上述基因片段,利用PRIMER EXPRESS 3.0 设计引物,以梯度稀释的质粒标准品进行定量PCR反应,以SYBR Green I为荧光染料,制作标准曲线,得到基因拷贝数X与Ct值的关系为:Ct=-3.50 lg X+39.35(相关系数r为0.999).通过对不同生长时期的东海原甲藻样品的Cytb基因mRNA含量检测,发现该基因的表达量较稳定,平均值为(45.4±4.7)拷贝/细胞,受生长状态影响不大,可作为实时荧光定量PCR的内参基因.
建立瞭檢測東海原甲藻線粒體細胞色素b(Cytb)基因mRNA含量的實時熒光定量PCR方法.以甲藻Cytb基因的簡併引物擴增得到984 bp長的東海原甲藻Cytb基因片段,經剋隆、測序,製備併純化質粒.以光度法測定質粒濃度併作為標準品.對上述基因片段,利用PRIMER EXPRESS 3.0 設計引物,以梯度稀釋的質粒標準品進行定量PCR反應,以SYBR Green I為熒光染料,製作標準麯線,得到基因拷貝數X與Ct值的關繫為:Ct=-3.50 lg X+39.35(相關繫數r為0.999).通過對不同生長時期的東海原甲藻樣品的Cytb基因mRNA含量檢測,髮現該基因的錶達量較穩定,平均值為(45.4±4.7)拷貝/細胞,受生長狀態影響不大,可作為實時熒光定量PCR的內參基因.
건립료검측동해원갑조선립체세포색소b(Cytb)기인mRNA함량적실시형광정량PCR방법.이갑조Cytb기인적간병인물확증득도984 bp장적동해원갑조Cytb기인편단,경극륭、측서,제비병순화질립.이광도법측정질립농도병작위표준품.대상술기인편단,이용PRIMER EXPRESS 3.0 설계인물,이제도희석적질립표준품진행정량PCR반응,이SYBR Green I위형광염료,제작표준곡선,득도기인고패수X여Ct치적관계위:Ct=-3.50 lg X+39.35(상관계수r위0.999).통과대불동생장시기적동해원갑조양품적Cytb기인mRNA함량검측,발현해기인적표체량교은정,평균치위(45.4±4.7)고패/세포,수생장상태영향불대,가작위실시형광정량PCR적내삼기인.
