畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
6期
892-898
,共7页
许信刚%王志昇%李兆才%张琪%童德文
許信剛%王誌昇%李兆纔%張琪%童德文
허신강%왕지승%리조재%장기%동덕문
杆状病毒表面展示系统%PRRSV%CSFV%GP5蛋白%E2蛋白
桿狀病毒錶麵展示繫統%PRRSV%CSFV%GP5蛋白%E2蛋白
간상병독표면전시계통%PRRSV%CSFV%GP5단백%E2단백
本试验旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗候选株.利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组杆状病毒BacSC-Dual-ORF5-E2.该重组病毒带有His6标签,且胞质区域(CTD)和跨膜区域(TM)均来源于杆状病毒囊膜蛋白gp64的CTD和TM.对重组病毒进行western blot分析、激光共聚焦显微镜观察、免疫金电子显微镜检测、动物免疫试验以及淋巴细胞增殖试验.Western blot分析结果表明,重组杆状病毒中表达了重组GP5和E2蛋白;激光共聚焦显微镜检测表明,重组杆状病毒感染昆虫细胞Sf-9后在细胞膜上展示了重组GP5和E2蛋白;免疫金电子显微镜观察表明,重组GP5和E2蛋白展示在杆状病毒囊膜上;动物免疫试验表明,重组杆状病毒免疫小鼠后产生了抗PRRSV和抗CSFV的特异性抗体;淋巴细胞增殖试验表明,重组杆状病毒能诱发较强的细胞免疫应答.本试验成功构建表面展示PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的重组杆状病毒,为下一步应用该重组杆状病毒作为双价亚单位疫苗预防PRRSV和CSFV的混合感染奠定基础.
本試驗旨在構建以桿狀病毒錶麵展示繫統為基礎的豬繁殖與呼吸綜閤徵和豬瘟雙價基因工程亞單位疫苗候選株.利用桿狀病毒錶麵展示技術構建展示豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)GP5蛋白和豬瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重組桿狀病毒BacSC-Dual-ORF5-E2.該重組病毒帶有His6標籤,且胞質區域(CTD)和跨膜區域(TM)均來源于桿狀病毒囊膜蛋白gp64的CTD和TM.對重組病毒進行western blot分析、激光共聚焦顯微鏡觀察、免疫金電子顯微鏡檢測、動物免疫試驗以及淋巴細胞增殖試驗.Western blot分析結果錶明,重組桿狀病毒中錶達瞭重組GP5和E2蛋白;激光共聚焦顯微鏡檢測錶明,重組桿狀病毒感染昆蟲細胞Sf-9後在細胞膜上展示瞭重組GP5和E2蛋白;免疫金電子顯微鏡觀察錶明,重組GP5和E2蛋白展示在桿狀病毒囊膜上;動物免疫試驗錶明,重組桿狀病毒免疫小鼠後產生瞭抗PRRSV和抗CSFV的特異性抗體;淋巴細胞增殖試驗錶明,重組桿狀病毒能誘髮較彊的細胞免疫應答.本試驗成功構建錶麵展示PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白的重組桿狀病毒,為下一步應用該重組桿狀病毒作為雙價亞單位疫苗預防PRRSV和CSFV的混閤感染奠定基礎.
본시험지재구건이간상병독표면전시계통위기출적저번식여호흡종합정화저온쌍개기인공정아단위역묘후선주.이용간상병독표면전시기술구건전시저번식여호흡종합정병독(PRRSV)GP5단백화저온병독(CSFV)E2단백적중조간상병독BacSC-Dual-ORF5-E2.해중조병독대유His6표첨,차포질구역(CTD)화과막구역(TM)균래원우간상병독낭막단백gp64적CTD화TM.대중조병독진행western blot분석、격광공취초현미경관찰、면역금전자현미경검측、동물면역시험이급림파세포증식시험.Western blot분석결과표명,중조간상병독중표체료중조GP5화E2단백;격광공취초현미경검측표명,중조간상병독감염곤충세포Sf-9후재세포막상전시료중조GP5화E2단백;면역금전자현미경관찰표명,중조GP5화E2단백전시재간상병독낭막상;동물면역시험표명,중조간상병독면역소서후산생료항PRRSV화항CSFV적특이성항체;림파세포증식시험표명,중조간상병독능유발교강적세포면역응답.본시험성공구건표면전시PRRSV GP5단백화CSFV E2단백적중조간상병독,위하일보응용해중조간상병독작위쌍개아단위역묘예방PRRSV화CSFV적혼합감염전정기출.
