遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2006年
1期
21-25
,共5页
陈功星%董庆华%张佳炜%符芳芳%许则丰%梁巧仪%郑树%丁佳逸
陳功星%董慶華%張佳煒%符芳芳%許則豐%樑巧儀%鄭樹%丁佳逸
진공성%동경화%장가위%부방방%허칙봉%량교의%정수%정가일
小干扰RNA%PLK1%基因表达
小榦擾RNA%PLK1%基因錶達
소간우RNA%PLK1%기인표체
为了研究特异小干扰RNA(siRNA)作用于大肠癌细胞株SW480中PLK1(Polo-like kinase 1)基因表达的mRNA对该细胞分裂生长的影响,设计了对应于PLK1基因表达mRNA不同位点的10种特异siRNA,经化学合成后,用脂质体转染SW480细胞,实时定量PCR检测PLK1基因的表达,观察不同的siRNA作用强度,并计数细胞了解相应细胞的生长情况,Western-blot观察PLK1表达蛋白的变化和流式细胞计数分析细胞周期改变.发现10种siRNA均可敲除PLK1基因表达的20%以上,其中P1、P4和P9 3组敲除mRNA达80%以上,这3种siRNA及其混合物对PLK1基因mRNA的作用具有相应浓度效应,在25 nmol/L时达到最佳作用效果,而且相同浓度的混合物作用效果更好(超过95%),PLK1表达蛋白质明显降低,细胞周期在G2期受到阻碍.72 h后的各种siRNA浓度下细胞生长变化与PLK1基因的mRNA水平变化相一致.结果表明化学合成的特异siRNA对SW480细胞中PLK1基因表达具有消除作用,混合物作用更强,在细胞水平上抑制了SW480细胞的分裂生长.
為瞭研究特異小榦擾RNA(siRNA)作用于大腸癌細胞株SW480中PLK1(Polo-like kinase 1)基因錶達的mRNA對該細胞分裂生長的影響,設計瞭對應于PLK1基因錶達mRNA不同位點的10種特異siRNA,經化學閤成後,用脂質體轉染SW480細胞,實時定量PCR檢測PLK1基因的錶達,觀察不同的siRNA作用彊度,併計數細胞瞭解相應細胞的生長情況,Western-blot觀察PLK1錶達蛋白的變化和流式細胞計數分析細胞週期改變.髮現10種siRNA均可敲除PLK1基因錶達的20%以上,其中P1、P4和P9 3組敲除mRNA達80%以上,這3種siRNA及其混閤物對PLK1基因mRNA的作用具有相應濃度效應,在25 nmol/L時達到最佳作用效果,而且相同濃度的混閤物作用效果更好(超過95%),PLK1錶達蛋白質明顯降低,細胞週期在G2期受到阻礙.72 h後的各種siRNA濃度下細胞生長變化與PLK1基因的mRNA水平變化相一緻.結果錶明化學閤成的特異siRNA對SW480細胞中PLK1基因錶達具有消除作用,混閤物作用更彊,在細胞水平上抑製瞭SW480細胞的分裂生長.
위료연구특이소간우RNA(siRNA)작용우대장암세포주SW480중PLK1(Polo-like kinase 1)기인표체적mRNA대해세포분렬생장적영향,설계료대응우PLK1기인표체mRNA불동위점적10충특이siRNA,경화학합성후,용지질체전염SW480세포,실시정량PCR검측PLK1기인적표체,관찰불동적siRNA작용강도,병계수세포료해상응세포적생장정황,Western-blot관찰PLK1표체단백적변화화류식세포계수분석세포주기개변.발현10충siRNA균가고제PLK1기인표체적20%이상,기중P1、P4화P9 3조고제mRNA체80%이상,저3충siRNA급기혼합물대PLK1기인mRNA적작용구유상응농도효응,재25 nmol/L시체도최가작용효과,이차상동농도적혼합물작용효과경호(초과95%),PLK1표체단백질명현강저,세포주기재G2기수도조애.72 h후적각충siRNA농도하세포생장변화여PLK1기인적mRNA수평변화상일치.결과표명화학합성적특이siRNA대SW480세포중PLK1기인표체구유소제작용,혼합물작용경강,재세포수평상억제료SW480세포적분렬생장.
