畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2007年
5期
12-16
,共5页
吴伟%徐日福%高光%孙永峰%王雪丽%单雪松%吴常信
吳偉%徐日福%高光%孫永峰%王雪麗%單雪鬆%吳常信
오위%서일복%고광%손영봉%왕설려%단설송%오상신
鹅%cDNA文库%SMART技术%泛素Ⅰ基因
鵝%cDNA文庫%SMART技術%汎素Ⅰ基因
아%cDNA문고%SMART기술%범소Ⅰ기인
本研究以8周龄的吉林白鹅胸肌组织为材料,利用SMART技术构建全长cDNA文库的方法,进行大片段双链cDNA扩增.经内切酶Sfi Ⅰ酶切并以改造后具有Sfi ⅠA和Sfi ⅠB接头序列的pBluescript ⅡSK质粒为连接载体,进行cDNA克隆,构建质粒cDNA文库.结果表明,所构建的肌肉组织cDNA文库滴度为1.01×106pfu/mL,质粒的转化重组率为97%,插入cDNA片段的大小在0.25～1.6 kb之间.随机取24个重组克隆子进行测序,所获得的unigene比率为66.7%,全长cDNA序列完整性比率为80%.将全长cDNA序列与GenBank数据库进行核苷酸同源性比较,发现其中-cDNA序列为鹅泛素Ⅰ基因.该基因的编码序列长918 bp,编码由305个氨基酸组成的多聚泛素蛋白.鹅泛素Ⅰ cDNA序列编码区与鸡等16种动物的同源序列比较显示,其相似性为87.3%～93.7%.该文库的构建为在分子水平上研究鹅肌肉组织的生长发育奠定了基础.
本研究以8週齡的吉林白鵝胸肌組織為材料,利用SMART技術構建全長cDNA文庫的方法,進行大片段雙鏈cDNA擴增.經內切酶Sfi Ⅰ酶切併以改造後具有Sfi ⅠA和Sfi ⅠB接頭序列的pBluescript ⅡSK質粒為連接載體,進行cDNA剋隆,構建質粒cDNA文庫.結果錶明,所構建的肌肉組織cDNA文庫滴度為1.01×106pfu/mL,質粒的轉化重組率為97%,插入cDNA片段的大小在0.25～1.6 kb之間.隨機取24箇重組剋隆子進行測序,所穫得的unigene比率為66.7%,全長cDNA序列完整性比率為80%.將全長cDNA序列與GenBank數據庫進行覈苷痠同源性比較,髮現其中-cDNA序列為鵝汎素Ⅰ基因.該基因的編碼序列長918 bp,編碼由305箇氨基痠組成的多聚汎素蛋白.鵝汎素Ⅰ cDNA序列編碼區與鷄等16種動物的同源序列比較顯示,其相似性為87.3%～93.7%.該文庫的構建為在分子水平上研究鵝肌肉組織的生長髮育奠定瞭基礎.
본연구이8주령적길림백아흉기조직위재료,이용SMART기술구건전장cDNA문고적방법,진행대편단쌍련cDNA확증.경내절매Sfi Ⅰ매절병이개조후구유Sfi ⅠA화Sfi ⅠB접두서렬적pBluescript ⅡSK질립위련접재체,진행cDNA극륭,구건질립cDNA문고.결과표명,소구건적기육조직cDNA문고적도위1.01×106pfu/mL,질립적전화중조솔위97%,삽입cDNA편단적대소재0.25～1.6 kb지간.수궤취24개중조극륭자진행측서,소획득적unigene비솔위66.7%,전장cDNA서렬완정성비솔위80%.장전장cDNA서렬여GenBank수거고진행핵감산동원성비교,발현기중-cDNA서렬위아범소Ⅰ기인.해기인적편마서렬장918 bp,편마유305개안기산조성적다취범소단백.아범소Ⅰ cDNA서렬편마구여계등16충동물적동원서렬비교현시,기상사성위87.3%～93.7%.해문고적구건위재분자수평상연구아기육조직적생장발육전정료기출.
