中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2007年
5期
357-362
,共6页
RAD16温度敏感突变株%分离与鉴定,遗传互补
RAD16溫度敏感突變株%分離與鑒定,遺傳互補
RAD16온도민감돌변주%분리여감정,유전호보
用PCR介导的基因重组法敲除酵母RAD16基因,用羟胺处理酵母RAD16基因表达质粒,获得RAD16基因突变库,并将其转化RAD16基因敲除的酵母细胞.用平皿复制法获得温度敏感突变株rad16-ts2,经互补试验证实,该突变表型为RAD16基因突变所致.将人cDNA表达文库转化rad16-ts2后筛选温度敏感拯救(rescue)表型,回收拯救表型酵母细胞中的质粒.测序结果表明,所获得的人cDNA克隆为HLTF/Zbu1/SMACA3基因.比较分析显示,人类该基因编码蛋白质氨基酸序列与酵母Rad16的同一性为32%,相似性则达50%.人HLTF/Zbu1/MACA3基因在HeLa细胞中过表达,可显著抑制过氧化氢损伤和UV照射诱导的细胞凋亡.
用PCR介導的基因重組法敲除酵母RAD16基因,用羥胺處理酵母RAD16基因錶達質粒,穫得RAD16基因突變庫,併將其轉化RAD16基因敲除的酵母細胞.用平皿複製法穫得溫度敏感突變株rad16-ts2,經互補試驗證實,該突變錶型為RAD16基因突變所緻.將人cDNA錶達文庫轉化rad16-ts2後篩選溫度敏感拯救(rescue)錶型,迴收拯救錶型酵母細胞中的質粒.測序結果錶明,所穫得的人cDNA剋隆為HLTF/Zbu1/SMACA3基因.比較分析顯示,人類該基因編碼蛋白質氨基痠序列與酵母Rad16的同一性為32%,相似性則達50%.人HLTF/Zbu1/MACA3基因在HeLa細胞中過錶達,可顯著抑製過氧化氫損傷和UV照射誘導的細胞凋亡.
용PCR개도적기인중조법고제효모RAD16기인,용간알처리효모RAD16기인표체질립,획득RAD16기인돌변고,병장기전화RAD16기인고제적효모세포.용평명복제법획득온도민감돌변주rad16-ts2,경호보시험증실,해돌변표형위RAD16기인돌변소치.장인cDNA표체문고전화rad16-ts2후사선온도민감증구(rescue)표형,회수증구표형효모세포중적질립.측서결과표명,소획득적인cDNA극륭위HLTF/Zbu1/SMACA3기인.비교분석현시,인류해기인편마단백질안기산서렬여효모Rad16적동일성위32%,상사성칙체50%.인HLTF/Zbu1/MACA3기인재HeLa세포중과표체,가현저억제과양화경손상화UV조사유도적세포조망.
