畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2009年
7期
24-28
,共5页
罗琼%田纯见%林志雄%陈茹%朱道中%黄青云
囉瓊%田純見%林誌雄%陳茹%硃道中%黃青雲
라경%전순견%림지웅%진여%주도중%황청운
水疱性口炎病毒%糖蛋白基因%克隆%逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)
水皰性口炎病毒%糖蛋白基因%剋隆%逆轉錄環介導等溫擴增(RT-LAMP)
수포성구염병독%당단백기인%극륭%역전록배개도등온확증(RT-LAMP)
根据逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)原理,针对水疱性口炎病毒(VSV)糖蛋白G基因序列中的6个区域设计内外各1对特异引物,建立扩增VSV糖蛋白(G)基因的RT-LAMP方法.扩增产物电泳呈特异的阶梯状条带分布,扩增产物加SYBB GREEN I染色呈特征性的黄绿色,肉眼可直接观察判定.同时,还建立了可以进行定量检测的实时RT-LAMP方法.特异性试验显示,本方法可快速检验鉴别VSV与口蹄疫病毒(FMDV)和猪水泡病病毒(SVDV).敏感性试验显示,建立的实时RT-LAMP方法检测VSV RNA的最低检测量为0.01 PFU,比实时荧光RT-PER显著提高.建立的LAMP方法可检测p-VSVNJ质粒DNA的最低量为6.36×10-3pg/μL(1.4×10-3 copies/μL),比PER也显著提高.综合表明,本研究建立RT-LAMP检测VSV的方法具有特异、敏感、快速、简便的特点,具有开发应用前景.
根據逆轉錄環介導等溫擴增(RT-LAMP)原理,針對水皰性口炎病毒(VSV)糖蛋白G基因序列中的6箇區域設計內外各1對特異引物,建立擴增VSV糖蛋白(G)基因的RT-LAMP方法.擴增產物電泳呈特異的階梯狀條帶分佈,擴增產物加SYBB GREEN I染色呈特徵性的黃綠色,肉眼可直接觀察判定.同時,還建立瞭可以進行定量檢測的實時RT-LAMP方法.特異性試驗顯示,本方法可快速檢驗鑒彆VSV與口蹄疫病毒(FMDV)和豬水泡病病毒(SVDV).敏感性試驗顯示,建立的實時RT-LAMP方法檢測VSV RNA的最低檢測量為0.01 PFU,比實時熒光RT-PER顯著提高.建立的LAMP方法可檢測p-VSVNJ質粒DNA的最低量為6.36×10-3pg/μL(1.4×10-3 copies/μL),比PER也顯著提高.綜閤錶明,本研究建立RT-LAMP檢測VSV的方法具有特異、敏感、快速、簡便的特點,具有開髮應用前景.
근거역전록배개도등온확증(RT-LAMP)원리,침대수포성구염병독(VSV)당단백G기인서렬중적6개구역설계내외각1대특이인물,건립확증VSV당단백(G)기인적RT-LAMP방법.확증산물전영정특이적계제상조대분포,확증산물가SYBB GREEN I염색정특정성적황록색,육안가직접관찰판정.동시,환건립료가이진행정량검측적실시RT-LAMP방법.특이성시험현시,본방법가쾌속검험감별VSV여구제역병독(FMDV)화저수포병병독(SVDV).민감성시험현시,건립적실시RT-LAMP방법검측VSV RNA적최저검측량위0.01 PFU,비실시형광RT-PER현저제고.건립적LAMP방법가검측p-VSVNJ질립DNA적최저량위6.36×10-3pg/μL(1.4×10-3 copies/μL),비PER야현저제고.종합표명,본연구건립RT-LAMP검측VSV적방법구유특이、민감、쾌속、간편적특점,구유개발응용전경.
