西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2011年
6期
33-37
,共5页
许丹%许信刚%王志昇%闫东东%童德文
許丹%許信剛%王誌昇%閆東東%童德文
허단%허신강%왕지승%염동동%동덕문
shiva-1a基因%杆状病毒表达系统%抗菌肽
shiva-1a基因%桿狀病毒錶達繫統%抗菌肽
shiva-1a기인%간상병독표체계통%항균태
根据GenBank上公布的shiva-1a的成熟肽基因序列,人工合成shiva-1a基因并加入6×His标签.将shiva-1a基因克隆到杆状病毒转座载体pBacFast-Dual中,筛选重组质粒,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组杆状病毒DNA,以脂质体介导法转染Sf-9昆虫细胞,待细胞出现病变后,收集上清液从而获得重组杆状病毒.用此杆状病毒感染的Sf-9细胞,Western blot检测出分子量约5 ku的shiva-1a多肽,与预期结果大小一致.体外抑菌试验证明,表达的shiva-1a多肽对大肠杆菌(DE3菌株)具有抑菌活性.
根據GenBank上公佈的shiva-1a的成熟肽基因序列,人工閤成shiva-1a基因併加入6×His標籤.將shiva-1a基因剋隆到桿狀病毒轉座載體pBacFast-Dual中,篩選重組質粒,轉化大腸桿菌DH10Bac感受態細胞,經藍白斑篩選得到重組桿狀病毒DNA,以脂質體介導法轉染Sf-9昆蟲細胞,待細胞齣現病變後,收集上清液從而穫得重組桿狀病毒.用此桿狀病毒感染的Sf-9細胞,Western blot檢測齣分子量約5 ku的shiva-1a多肽,與預期結果大小一緻.體外抑菌試驗證明,錶達的shiva-1a多肽對大腸桿菌(DE3菌株)具有抑菌活性.
근거GenBank상공포적shiva-1a적성숙태기인서렬,인공합성shiva-1a기인병가입6×His표첨.장shiva-1a기인극륭도간상병독전좌재체pBacFast-Dual중,사선중조질립,전화대장간균DH10Bac감수태세포,경람백반사선득도중조간상병독DNA,이지질체개도법전염Sf-9곤충세포,대세포출현병변후,수집상청액종이획득중조간상병독.용차간상병독감염적Sf-9세포,Western blot검측출분자량약5 ku적shiva-1a다태,여예기결과대소일치.체외억균시험증명,표체적shiva-1a다태대대장간균(DE3균주)구유억균활성.
