植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2011年
2期
161-170
,共10页
牟海青%周涛%赵文军%朱水芳%林彩丽%李怀方%范在丰%田国忠
牟海青%週濤%趙文軍%硃水芳%林綵麗%李懷方%範在豐%田國忠
모해청%주도%조문군%주수방%림채려%리부방%범재봉%전국충
泡桐丛枝病%植原体%抗原膜蛋白%大肠杆菌
泡桐叢枝病%植原體%抗原膜蛋白%大腸桿菌
포동총지병%식원체%항원막단백%대장간균
根据报道的泡桐丛枝植原体(Paulownia witches'-broom phytoplasma,PaWB)抗原膜蛋白(antigenic membrane protein,AMP)基因的核苷酸序列设计引物,提取发病泡桐总DNA,经PCR扩增并成功克隆泡桐丛枝植原体amp基因.序列分析表明,amp基因由696个核苷酸组成,编码231个氨基酸残基,与GenBank中登录的2个泡桐丛枝植原体的膜蛋白核苷酸序列同源性为100%.将amp基因91-604 nt部分序列(命名为ampd)克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,诱导后,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表明融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达.以纯化的带GST标签的AMPD融合蛋白为抗原免疫德国大白兔,制备了PawB-AMPD抗血清.利用该血清,通过Western印迹、点印迹、ELISA、间接免疫荧光和免疫捕获PCR试验均能在发病泡桐组织中特异检测到泡桐丛枝植原体.
根據報道的泡桐叢枝植原體(Paulownia witches'-broom phytoplasma,PaWB)抗原膜蛋白(antigenic membrane protein,AMP)基因的覈苷痠序列設計引物,提取髮病泡桐總DNA,經PCR擴增併成功剋隆泡桐叢枝植原體amp基因.序列分析錶明,amp基因由696箇覈苷痠組成,編碼231箇氨基痠殘基,與GenBank中登錄的2箇泡桐叢枝植原體的膜蛋白覈苷痠序列同源性為100%.將amp基因91-604 nt部分序列(命名為ampd)剋隆到原覈錶達載體pGEX-4T-3,誘導後,經SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析,錶明融閤蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中得到瞭高效錶達.以純化的帶GST標籤的AMPD融閤蛋白為抗原免疫德國大白兔,製備瞭PawB-AMPD抗血清.利用該血清,通過Western印跡、點印跡、ELISA、間接免疫熒光和免疫捕穫PCR試驗均能在髮病泡桐組織中特異檢測到泡桐叢枝植原體.
근거보도적포동총지식원체(Paulownia witches'-broom phytoplasma,PaWB)항원막단백(antigenic membrane protein,AMP)기인적핵감산서렬설계인물,제취발병포동총DNA,경PCR확증병성공극륭포동총지식원체amp기인.서렬분석표명,amp기인유696개핵감산조성,편마231개안기산잔기,여GenBank중등록적2개포동총지식원체적막단백핵감산서렬동원성위100%.장amp기인91-604 nt부분서렬(명명위ampd)극륭도원핵표체재체pGEX-4T-3,유도후,경SDS취병희선알응효전영분석,표명융합단백재대장간균BL21(DE3)중득도료고효표체.이순화적대GST표첨적AMPD융합단백위항원면역덕국대백토,제비료PawB-AMPD항혈청.이용해혈청,통과Western인적、점인적、ELISA、간접면역형광화면역포획PCR시험균능재발병포동조직중특이검측도포동총지식원체.
