厦门大学学报（自然科学版）
廈門大學學報（自然科學版）
하문대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2006年
z1期
134-137
,共4页
VMP1%表达%抗体制备%纯化
VMP1%錶達%抗體製備%純化
VMP1%표체%항체제비%순화
为了得到效价高、特异性强、能用于检测内源性 VMP1 蛋白的抗体,采用RT-PCR 法,从L929细胞株中克隆鼠VMP1基因,重组入pCMV5载体,用 PCR 扩增与其氨基酸 132-239 区域对应的DNA片断,将该片段连接到原核表达载体 pGST parallel 中,在大肠杆菌 BL21 菌株中大量表达,经谷胱甘肽-琼脂糖树脂纯化后,得到高纯度的 VMP1抗原.免疫新西兰兔,获得抗 VMP1 蛋白的兔抗血清,将血清纯化后即得到抗 VMP1 的多克隆抗体.用 Western blot 分析手段检测了该抗体的特异性及效价.在用该抗体检测外源性和内源性 VMP1 蛋白的试验中,证实该抗体效价高,特异性强,效果很理想.此方法可用于获得大量廉价的抗 VMP1 蛋白的高滴度和高特异性的抗体,为进一步研究 VMP1 在细胞内,尤其是在信号转导通路中的功能和作用奠定了基础.
為瞭得到效價高、特異性彊、能用于檢測內源性 VMP1 蛋白的抗體,採用RT-PCR 法,從L929細胞株中剋隆鼠VMP1基因,重組入pCMV5載體,用 PCR 擴增與其氨基痠 132-239 區域對應的DNA片斷,將該片段連接到原覈錶達載體 pGST parallel 中,在大腸桿菌 BL21 菌株中大量錶達,經穀胱甘肽-瓊脂糖樹脂純化後,得到高純度的 VMP1抗原.免疫新西蘭兔,穫得抗 VMP1 蛋白的兔抗血清,將血清純化後即得到抗 VMP1 的多剋隆抗體.用 Western blot 分析手段檢測瞭該抗體的特異性及效價.在用該抗體檢測外源性和內源性 VMP1 蛋白的試驗中,證實該抗體效價高,特異性彊,效果很理想.此方法可用于穫得大量廉價的抗 VMP1 蛋白的高滴度和高特異性的抗體,為進一步研究 VMP1 在細胞內,尤其是在信號轉導通路中的功能和作用奠定瞭基礎.
위료득도효개고、특이성강、능용우검측내원성 VMP1 단백적항체,채용RT-PCR 법,종L929세포주중극륭서VMP1기인,중조입pCMV5재체,용 PCR 확증여기안기산 132-239 구역대응적DNA편단,장해편단련접도원핵표체재체 pGST parallel 중,재대장간균 BL21 균주중대량표체,경곡광감태-경지당수지순화후,득도고순도적 VMP1항원.면역신서란토,획득항 VMP1 단백적토항혈청,장혈청순화후즉득도항 VMP1 적다극륭항체.용 Western blot 분석수단검측료해항체적특이성급효개.재용해항체검측외원성화내원성 VMP1 단백적시험중,증실해항체효개고,특이성강,효과흔이상.차방법가용우획득대량렴개적항 VMP1 단백적고적도화고특이성적항체,위진일보연구 VMP1 재세포내,우기시재신호전도통로중적공능화작용전정료기출.
