微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2008年
1期
11-16
,共6页
娄强%朱涛%王家学%吴旸%朱于莉%瞿涤
婁彊%硃濤%王傢學%吳旸%硃于莉%瞿滌
루강%주도%왕가학%오양%주우리%구조
基因删除%pMAD%pBT2%表皮葡萄球菌%双组分信号转导系统
基因刪除%pMAD%pBT2%錶皮葡萄毬菌%雙組分信號轉導繫統
기인산제%pMAD%pBT2%표피포도구균%쌍조분신호전도계통
目的 探讨高效的表皮葡萄球菌基因删除突变株构建方法.方法 分别应用2种不同的穿梭质粒pMAD和pBT2,连接目的基因表皮葡萄球菌双组分信号转导系统arlS、saeRS和lytS的上下游片段,构建重组质粒,电转入金黄色葡萄球菌RN4220后转入表皮葡萄球菌1457,利用抗性和生物标志筛选出针对特定目的基因的突变株SE1457-△arlS、SE1457-△saeRS和SE1457-△lytS,比较2种方法的优、缺点.结果 利用pMAD和pBT2分别构建基因删除同源重组质粒pMAD-△saeRS、pBT2-△arlrlS和pBT2-AlytS,并均获得相应的表皮葡萄球菌基因删除突变株.在筛选过程中,以pMAD为载体构建基因删除突变株,仅需1轮抗性/蓝白斑筛选过程即获突变株;而以pBT2为载体构建基因删除突变株筛选方法,需经过5～10轮的筛选才可获得突变株.基因删除突变株经聚合酶链反应(PCR)和测序等鉴定确认.与野生株相比,SE1457-△arlS突变株的生物膜形成能力降低90.96%,而SE1457-△saeRS和SE1457-△lytS株的生物膜形成能力略有增加.结论 以pMAD载体构建表皮葡萄球菌突变株比较快速和简便.
目的 探討高效的錶皮葡萄毬菌基因刪除突變株構建方法.方法 分彆應用2種不同的穿梭質粒pMAD和pBT2,連接目的基因錶皮葡萄毬菌雙組分信號轉導繫統arlS、saeRS和lytS的上下遊片段,構建重組質粒,電轉入金黃色葡萄毬菌RN4220後轉入錶皮葡萄毬菌1457,利用抗性和生物標誌篩選齣針對特定目的基因的突變株SE1457-△arlS、SE1457-△saeRS和SE1457-△lytS,比較2種方法的優、缺點.結果 利用pMAD和pBT2分彆構建基因刪除同源重組質粒pMAD-△saeRS、pBT2-△arlrlS和pBT2-AlytS,併均穫得相應的錶皮葡萄毬菌基因刪除突變株.在篩選過程中,以pMAD為載體構建基因刪除突變株,僅需1輪抗性/藍白斑篩選過程即穫突變株;而以pBT2為載體構建基因刪除突變株篩選方法,需經過5～10輪的篩選纔可穫得突變株.基因刪除突變株經聚閤酶鏈反應(PCR)和測序等鑒定確認.與野生株相比,SE1457-△arlS突變株的生物膜形成能力降低90.96%,而SE1457-△saeRS和SE1457-△lytS株的生物膜形成能力略有增加.結論 以pMAD載體構建錶皮葡萄毬菌突變株比較快速和簡便.
목적 탐토고효적표피포도구균기인산제돌변주구건방법.방법 분별응용2충불동적천사질립pMAD화pBT2,련접목적기인표피포도구균쌍조분신호전도계통arlS、saeRS화lytS적상하유편단,구건중조질립,전전입금황색포도구균RN4220후전입표피포도구균1457,이용항성화생물표지사선출침대특정목적기인적돌변주SE1457-△arlS、SE1457-△saeRS화SE1457-△lytS,비교2충방법적우、결점.결과 이용pMAD화pBT2분별구건기인산제동원중조질립pMAD-△saeRS、pBT2-△arlrlS화pBT2-AlytS,병균획득상응적표피포도구균기인산제돌변주.재사선과정중,이pMAD위재체구건기인산제돌변주,부수1륜항성/람백반사선과정즉획돌변주;이이pBT2위재체구건기인산제돌변주사선방법,수경과5～10륜적사선재가획득돌변주.기인산제돌변주경취합매련반응(PCR)화측서등감정학인.여야생주상비,SE1457-△arlS돌변주적생물막형성능력강저90.96%,이SE1457-△saeRS화SE1457-△lytS주적생물막형성능력략유증가.결론 이pMAD재체구건표피포도구균돌변주비교쾌속화간편.
