中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
5期
405-409
,共5页
孙红%万忠海%张国利%吴广谋%朱平%岳玉环
孫紅%萬忠海%張國利%吳廣謀%硃平%嶽玉環
손홍%만충해%장국리%오엄모%주평%악옥배
细胞间黏附分子-1%单链抗体%表达%活性
細胞間黏附分子-1%單鏈抗體%錶達%活性
세포간점부분자-1%단련항체%표체%활성
目的 构建抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单链抗体(ScFv)的表达载体,并在大肠肝菌中表达.方法 从分泌ICAM-1单抗的杂交瘤细胞中提取RNA,用RT-PCR扩增抗体VH和VL基因,重叠延伸PCR扩增人ICAM-1-ScFv基因,将其连接到pET-22b(+)载体上,转化大肠杆菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化及复性后,检测特异性及活性.结果 序列分析表明抗ICAM-1 ScFv基因全长为744 bp,编码247个氨基酸,其中含357 bp的VH基因片段和342 bp的VL基因片段.表达蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的32%.经变性和复性后,纯度达80%以上,复性率达25%.Western blot和ELISA检测,ScFv均可与ICAM-1抗原特异性结合.细胞黏附试验表明ScFv能抑制ICAM-1与HSB2细胞间的黏附,其作用稍弱于亲本mAb.结论 已成功构建了抗人ICAM-1的ScFv表达载体,其表达产物具有抗体特异性和活性.
目的 構建抗人細胞間黏附分子-1(ICAM-1)單鏈抗體(ScFv)的錶達載體,併在大腸肝菌中錶達.方法 從分泌ICAM-1單抗的雜交瘤細胞中提取RNA,用RT-PCR擴增抗體VH和VL基因,重疊延伸PCR擴增人ICAM-1-ScFv基因,將其連接到pET-22b(+)載體上,轉化大腸桿菌BL2(DE3),IPTG誘導錶達,錶達產物純化及複性後,檢測特異性及活性.結果 序列分析錶明抗ICAM-1 ScFv基因全長為744 bp,編碼247箇氨基痠,其中含357 bp的VH基因片段和342 bp的VL基因片段.錶達蛋白以包涵體形式存在,錶達量佔菌體總蛋白的32%.經變性和複性後,純度達80%以上,複性率達25%.Western blot和ELISA檢測,ScFv均可與ICAM-1抗原特異性結閤.細胞黏附試驗錶明ScFv能抑製ICAM-1與HSB2細胞間的黏附,其作用稍弱于親本mAb.結論 已成功構建瞭抗人ICAM-1的ScFv錶達載體,其錶達產物具有抗體特異性和活性.
목적 구건항인세포간점부분자-1(ICAM-1)단련항체(ScFv)적표체재체,병재대장간균중표체.방법 종분비ICAM-1단항적잡교류세포중제취RNA,용RT-PCR확증항체VH화VL기인,중첩연신PCR확증인ICAM-1-ScFv기인,장기련접도pET-22b(+)재체상,전화대장간균BL2(DE3),IPTG유도표체,표체산물순화급복성후,검측특이성급활성.결과 서렬분석표명항ICAM-1 ScFv기인전장위744 bp,편마247개안기산,기중함357 bp적VH기인편단화342 bp적VL기인편단.표체단백이포함체형식존재,표체량점균체총단백적32%.경변성화복성후,순도체80%이상,복성솔체25%.Western blot화ELISA검측,ScFv균가여ICAM-1항원특이성결합.세포점부시험표명ScFv능억제ICAM-1여HSB2세포간적점부,기작용초약우친본mAb.결론 이성공구건료항인ICAM-1적ScFv표체재체,기표체산물구유항체특이성화활성.
