同济大学学报（医学版）
同濟大學學報（醫學版）
동제대학학보（의학판）
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)
2010年
2期
8-13
,共6页
刘威威%尹岚%张琪敏%陈春霞%戴亚蕾
劉威威%尹嵐%張琪敏%陳春霞%戴亞蕾
류위위%윤람%장기민%진춘하%대아뢰
清道夫受体%SR-PSOX%定点突变%转染
清道伕受體%SR-PSOX%定點突變%轉染
청도부수체%SR-PSOX%정점돌변%전염
目的 构建清道夫受体SR-PSOX点突变体,揭示该受体与脂质结合的关键位点,为确定SR-PSOX在脂质摄取、泡沫细胞形成中的作用提供模型.方法 利用分子克隆及PCR定点突变技术,构建不同突变点的片段并克隆到pEGFP-N3中,形成含有SR-PSOX各联合突变的pEGFP-SR-PSOX突变体质粒.转染293T细胞后采用流式检测受体表达情况.结果 从THP-1源性的巨噬细胞中成功克隆SR-PSOX受体并在真核表达载体pEGFP-SR-PSOX基础上获得了SR-PSOX三种突变体(R78、R82H85、R78R82H85).测序结果表明SR-PSOX序列中发生了预期的突变,使SR-PSOX受体中第78位精氨酸单点突变,第82位精氨酸、第85位组氨酸双点突变,第78、82位精氨酸和第85位组氨酸三点突变,均突变为丙氨酸.并将所有pEGFP-SR-PSOX突变体在293T细胞膜表面成功表达.结论 定点突变PCR可以成功构建SR-PSOX受体的3种突变体,使之在293T细胞表面获得表达,为进一步研究SR-PSOX的功能奠定了基础.
目的 構建清道伕受體SR-PSOX點突變體,揭示該受體與脂質結閤的關鍵位點,為確定SR-PSOX在脂質攝取、泡沫細胞形成中的作用提供模型.方法 利用分子剋隆及PCR定點突變技術,構建不同突變點的片段併剋隆到pEGFP-N3中,形成含有SR-PSOX各聯閤突變的pEGFP-SR-PSOX突變體質粒.轉染293T細胞後採用流式檢測受體錶達情況.結果 從THP-1源性的巨噬細胞中成功剋隆SR-PSOX受體併在真覈錶達載體pEGFP-SR-PSOX基礎上穫得瞭SR-PSOX三種突變體(R78、R82H85、R78R82H85).測序結果錶明SR-PSOX序列中髮生瞭預期的突變,使SR-PSOX受體中第78位精氨痠單點突變,第82位精氨痠、第85位組氨痠雙點突變,第78、82位精氨痠和第85位組氨痠三點突變,均突變為丙氨痠.併將所有pEGFP-SR-PSOX突變體在293T細胞膜錶麵成功錶達.結論 定點突變PCR可以成功構建SR-PSOX受體的3種突變體,使之在293T細胞錶麵穫得錶達,為進一步研究SR-PSOX的功能奠定瞭基礎.
목적 구건청도부수체SR-PSOX점돌변체,게시해수체여지질결합적관건위점,위학정SR-PSOX재지질섭취、포말세포형성중적작용제공모형.방법 이용분자극륭급PCR정점돌변기술,구건불동돌변점적편단병극륭도pEGFP-N3중,형성함유SR-PSOX각연합돌변적pEGFP-SR-PSOX돌변체질립.전염293T세포후채용류식검측수체표체정황.결과 종THP-1원성적거서세포중성공극륭SR-PSOX수체병재진핵표체재체pEGFP-SR-PSOX기출상획득료SR-PSOX삼충돌변체(R78、R82H85、R78R82H85).측서결과표명SR-PSOX서렬중발생료예기적돌변,사SR-PSOX수체중제78위정안산단점돌변,제82위정안산、제85위조안산쌍점돌변,제78、82위정안산화제85위조안산삼점돌변,균돌변위병안산.병장소유pEGFP-SR-PSOX돌변체재293T세포막표면성공표체.결론 정점돌변PCR가이성공구건SR-PSOX수체적3충돌변체,사지재293T세포표면획득표체,위진일보연구SR-PSOX적공능전정료기출.
