中国运动医学杂志
中國運動醫學雜誌
중국운동의학잡지
CHINESE JOURNAL OF SPORTS MEDICINE
2011年
7期
644-649
,共6页
薛涛%林霖%魏学磊%张继英%傅欣%段小宁%于长隆
薛濤%林霖%魏學磊%張繼英%傅訢%段小寧%于長隆
설도%림림%위학뢰%장계영%부흔%단소저%우장륭
siRNA%Smad4%Runx2%非病毒载体%异位骨化
siRNA%Smad4%Runx2%非病毒載體%異位骨化
siRNA%Smad4%Runx2%비병독재체%이위골화
目的:研究siRNA抑制Smad4基因表达治疗异位骨化大鼠模型的效果,并与抑制Runx2的疗效进行比较.方法:1、设计6条分别针对大鼠Smad4和Runx2的mRNA模板,用体外转录合成法分别合成6条siRNA,采用RT-PCR从mRNA水平在培养的原代成骨前体细胞中筛选有明显抑制作用的siRNA.2、设计合成针对Smad4基因和Runx2基因编码的发卡样siRNA的双链DNA,与腺病毒的穿梭质粒连接后,取其启动子和终止子连接于非病毒载体上.在培养的大鼠原代成骨细胞中,采用RT-PCR和western blot测定Smad4特异性siRNA非病毒对Smad4的抑制作用和Runx2特异性siRNA非病毒对Runx2的抑制作用.3、采用体内实验测定Smad4或Runx2特异性siRNA非病毒载体对切断大鼠跟腱诱导异位骨化动物模型的影响:实验组行跟腱切断术和植入100μg的Smad4-siRNA或Runx2-siRNA重组非病毒载体,对照组行跟腱切断术和植入100 μg的pcDNA4/HisA非病毒载体.10周后,行CT三位重建检测形成的异位骨大小,HE染色观察其组织形态.结果:1、在合成的3条Smad4-siRNA中,siRNA<'139-159>对Smad4抑制效果最明显,在合成的3条Runx2-siRNA中,siRNA<'1057-1077>对Runx2的抑制效果最明显.2、成功构建重组非病毒载体,转染原代成骨细胞可明显抑制Smad4和Runx2的表达.3、CT_E位重建显示,Smad4-siRNA实验组形成的异位骨体积较对照组减小92%,Runx2-siRNA实验组形成的异位骨体积较对照组减小93%,差异均有统计学意义(P<0.05).组织学观察显示非病毒载体介导的特异性[Smad4-siRNA和Runx2-siRNA在体内可以抑制异位骨形成,两者之间的抑制效果差异无统计学意义(P>0.05).结论:Smad4和Runx2两种信号通路的特异性siRNA可以明显抑制切断跟腱诱导的异位骨化,但两种不同siRNA的抑制效果无差别.
目的:研究siRNA抑製Smad4基因錶達治療異位骨化大鼠模型的效果,併與抑製Runx2的療效進行比較.方法:1、設計6條分彆針對大鼠Smad4和Runx2的mRNA模闆,用體外轉錄閤成法分彆閤成6條siRNA,採用RT-PCR從mRNA水平在培養的原代成骨前體細胞中篩選有明顯抑製作用的siRNA.2、設計閤成針對Smad4基因和Runx2基因編碼的髮卡樣siRNA的雙鏈DNA,與腺病毒的穿梭質粒連接後,取其啟動子和終止子連接于非病毒載體上.在培養的大鼠原代成骨細胞中,採用RT-PCR和western blot測定Smad4特異性siRNA非病毒對Smad4的抑製作用和Runx2特異性siRNA非病毒對Runx2的抑製作用.3、採用體內實驗測定Smad4或Runx2特異性siRNA非病毒載體對切斷大鼠跟腱誘導異位骨化動物模型的影響:實驗組行跟腱切斷術和植入100μg的Smad4-siRNA或Runx2-siRNA重組非病毒載體,對照組行跟腱切斷術和植入100 μg的pcDNA4/HisA非病毒載體.10週後,行CT三位重建檢測形成的異位骨大小,HE染色觀察其組織形態.結果:1、在閤成的3條Smad4-siRNA中,siRNA<'139-159>對Smad4抑製效果最明顯,在閤成的3條Runx2-siRNA中,siRNA<'1057-1077>對Runx2的抑製效果最明顯.2、成功構建重組非病毒載體,轉染原代成骨細胞可明顯抑製Smad4和Runx2的錶達.3、CT_E位重建顯示,Smad4-siRNA實驗組形成的異位骨體積較對照組減小92%,Runx2-siRNA實驗組形成的異位骨體積較對照組減小93%,差異均有統計學意義(P<0.05).組織學觀察顯示非病毒載體介導的特異性[Smad4-siRNA和Runx2-siRNA在體內可以抑製異位骨形成,兩者之間的抑製效果差異無統計學意義(P>0.05).結論:Smad4和Runx2兩種信號通路的特異性siRNA可以明顯抑製切斷跟腱誘導的異位骨化,但兩種不同siRNA的抑製效果無差彆.
목적:연구siRNA억제Smad4기인표체치료이위골화대서모형적효과,병여억제Runx2적료효진행비교.방법:1、설계6조분별침대대서Smad4화Runx2적mRNA모판,용체외전록합성법분별합성6조siRNA,채용RT-PCR종mRNA수평재배양적원대성골전체세포중사선유명현억제작용적siRNA.2、설계합성침대Smad4기인화Runx2기인편마적발잡양siRNA적쌍련DNA,여선병독적천사질립련접후,취기계동자화종지자련접우비병독재체상.재배양적대서원대성골세포중,채용RT-PCR화western blot측정Smad4특이성siRNA비병독대Smad4적억제작용화Runx2특이성siRNA비병독대Runx2적억제작용.3、채용체내실험측정Smad4혹Runx2특이성siRNA비병독재체대절단대서근건유도이위골화동물모형적영향:실험조행근건절단술화식입100μg적Smad4-siRNA혹Runx2-siRNA중조비병독재체,대조조행근건절단술화식입100 μg적pcDNA4/HisA비병독재체.10주후,행CT삼위중건검측형성적이위골대소,HE염색관찰기조직형태.결과:1、재합성적3조Smad4-siRNA중,siRNA<'139-159>대Smad4억제효과최명현,재합성적3조Runx2-siRNA중,siRNA<'1057-1077>대Runx2적억제효과최명현.2、성공구건중조비병독재체,전염원대성골세포가명현억제Smad4화Runx2적표체.3、CT_E위중건현시,Smad4-siRNA실험조형성적이위골체적교대조조감소92%,Runx2-siRNA실험조형성적이위골체적교대조조감소93%,차이균유통계학의의(P<0.05).조직학관찰현시비병독재체개도적특이성[Smad4-siRNA화Runx2-siRNA재체내가이억제이위골형성,량자지간적억제효과차이무통계학의의(P>0.05).결론:Smad4화Runx2량충신호통로적특이성siRNA가이명현억제절단근건유도적이위골화,단량충불동siRNA적억제효과무차별.
