CAJ | 학술논문

强壮弧菌Vibrio fortis是虾夷马粪海胆Strongylocentrotus intermedius的一种致病菌.为建立强壮弧菌的PCR检测方法,根据强壮弧菌gyrB基因的高度变异区序列设计引物,筛选出特异性强的3对引物VF-6、VF-7及VF-8,分别对强壮弧菌S0907及20株参比菌株进行PCR扩增,结果显示,3对引物均对强壮弧菌扩增出与预期大小一致的目的基因片段且参考菌株无扩增条带.以不同稀释度的菌悬液制备的DNA模板进行PCR扩增,结果显示,3对引物VF-6、VF-7及VF-8可检测的最低细菌浓度分别为4.1×104、4.1×103、4.1 ×102cfu/mL;对不同稀释度的细菌DNA模板进行PCR扩增,结果显示,3对引物VF-6、VF-7及VF-8可检测的最低DNA含量分别为1.4、0.14、0.014 pg/μL.试验结果表明:3对引物的特异性均较好,但灵敏度存在差异,其中以VF-8为引物的PCR检测方法最佳；使用以VF-8为引物的PCR检测方法对实验室养殖海胆及其生境样品进行初步检测,健康海胆、养殖海水及投喂的海带均为阴性,而自然海域海水中带有一定量的强壮弧菌.
강장호균Vibrio fortis시하이마분해담Strongylocentrotus intermedius적일충치병균.위건립강장호균적PCR검측방법,근거강장호균gyrB기인적고도변이구서렬설계인물,사선출특이성강적3대인물VF-6、VF-7급VF-8,분별대강장호균S0907급20주삼비균주진행PCR확증,결과현시,3대인물균대강장호균확증출여예기대소일치적목적기인편단차삼고균주무확증조대.이불동희석도적균현액제비적DNA모판진행PCR확증,결과현시,3대인물VF-6、VF-7급VF-8가검측적최저세균농도분별위4.1×104、4.1×103、4.1 ×102cfu/mL;대불동희석도적세균DNA모판진행PCR확증,결과현시,3대인물VF-6、VF-7급VF-8가검측적최저DNA함량분별위1.4、0.14、0.014 pg/μL.시험결과표명:3대인물적특이성균교호,단령민도존재차이,기중이VF-8위인물적PCR검측방법최가；사용이VF-8위인물적PCR검측방법대실험실양식해담급기생경양품진행초보검측,건강해담、양식해수급투위적해대균위음성,이자연해역해수중대유일정량적강장호균.