中国兽医科技
中國獸醫科技
중국수의과기
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE AND TECHNOLOGY
2003年
1期
5-10
,共6页
王鹏雁%陈创夫%余兴龙%徐兴然%涂长春%张高轩
王鵬雁%陳創伕%餘興龍%徐興然%塗長春%張高軒
왕붕안%진창부%여흥룡%서흥연%도장춘%장고헌
VP4基因%VP7基因%载体构建%原核表达
VP4基因%VP7基因%載體構建%原覈錶達
VP4기인%VP7기인%재체구건%원핵표체
经PCR从含有VP4基因、VP7基因片段的重组质粒pT-VP4和pT-VP7中扩增VP4、VP7基因,连接至pGEM-5zf(+).经筛选和鉴定正确后同时酶切目的基因和表达质粒pET-28a(+),连接、转化受体菌,经PCR、酶切和序列分析证明,连接向位和阅读框架是正确的,从而构建了轮状病毒保护性抗原VP4基因、VP7基因片段的原核表达载体pET28a-VP4、pET28a-VP7.重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下,用SDS-PAGE、薄层凝胶扫描分析表达的蛋白.结果表明,表达的目的蛋白以包涵体的形式存在,蛋白的分子量分别为37.69和36.20 ku,表达量占菌体总蛋白的比例分别为17.1%和14.4%.
經PCR從含有VP4基因、VP7基因片段的重組質粒pT-VP4和pT-VP7中擴增VP4、VP7基因,連接至pGEM-5zf(+).經篩選和鑒定正確後同時酶切目的基因和錶達質粒pET-28a(+),連接、轉化受體菌,經PCR、酶切和序列分析證明,連接嚮位和閱讀框架是正確的,從而構建瞭輪狀病毒保護性抗原VP4基因、VP7基因片段的原覈錶達載體pET28a-VP4、pET28a-VP7.重組質粒轉化錶達菌在IPTG誘導下,用SDS-PAGE、薄層凝膠掃描分析錶達的蛋白.結果錶明,錶達的目的蛋白以包涵體的形式存在,蛋白的分子量分彆為37.69和36.20 ku,錶達量佔菌體總蛋白的比例分彆為17.1%和14.4%.
경PCR종함유VP4기인、VP7기인편단적중조질립pT-VP4화pT-VP7중확증VP4、VP7기인,련접지pGEM-5zf(+).경사선화감정정학후동시매절목적기인화표체질립pET-28a(+),련접、전화수체균,경PCR、매절화서렬분석증명,련접향위화열독광가시정학적,종이구건료륜상병독보호성항원VP4기인、VP7기인편단적원핵표체재체pET28a-VP4、pET28a-VP7.중조질립전화표체균재IPTG유도하,용SDS-PAGE、박층응효소묘분석표체적단백.결과표명,표체적목적단백이포함체적형식존재,단백적분자량분별위37.69화36.20 ku,표체량점균체총단백적비례분별위17.1%화14.4%.
