细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2003年
5期
440-442
,共3页
徐江英%许琳%彭光勇%丁传林%卢是月%姚堃
徐江英%許琳%彭光勇%丁傳林%盧是月%姚堃
서강영%허림%팽광용%정전림%로시월%요곤
人硫氧还蛋白还原酶基因%腺病毒%基因表达载体
人硫氧還蛋白還原酶基因%腺病毒%基因錶達載體
인류양환단백환원매기인%선병독%기인표체재체
目的:构建含人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因的重组腺病毒载体,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性.方法:从重组质粒pGEM-TR上用内切酶切下编码500个氨基酸的全长TR cDNA片段,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle-TR.将带有CMV启动子的目的片段,插入E1、E3缺失的Adeno-X病毒DNA中,以Adeno-TR DNA通过脂质体转染HEK293细胞,获得重组腺病毒Adeno-TR进行PCR鉴定及病毒滴度测定.用重组腺病毒感染CV1细胞,通过免疫荧光染色与Western blot分别检测重组腺病毒感染的细胞上和裂解液中TR蛋白的表达.结果:重组腺病毒Adeno-TR的病毒滴度为4.4×1011pfu/L.PCR、荧光显微镜证实,以及Western bolt分析,在相对分子质量(Mr)约55 000处均出现特异性条带.结论:成功地构建了重组腺病毒载体,并能介导外源基因TR表达,为进一步研究TR的功能及其与疾病的相关性奠定了基础.
目的:構建含人硫氧還蛋白還原酶(TR)基因的重組腺病毒載體,探討TR的抗氧化功能與神經退行性疾病的相關性.方法:從重組質粒pGEM-TR上用內切酶切下編碼500箇氨基痠的全長TR cDNA片段,併連接穿梭質粒pShuttle,再雙酶切pShuttle-TR.將帶有CMV啟動子的目的片段,插入E1、E3缺失的Adeno-X病毒DNA中,以Adeno-TR DNA通過脂質體轉染HEK293細胞,穫得重組腺病毒Adeno-TR進行PCR鑒定及病毒滴度測定.用重組腺病毒感染CV1細胞,通過免疫熒光染色與Western blot分彆檢測重組腺病毒感染的細胞上和裂解液中TR蛋白的錶達.結果:重組腺病毒Adeno-TR的病毒滴度為4.4×1011pfu/L.PCR、熒光顯微鏡證實,以及Western bolt分析,在相對分子質量(Mr)約55 000處均齣現特異性條帶.結論:成功地構建瞭重組腺病毒載體,併能介導外源基因TR錶達,為進一步研究TR的功能及其與疾病的相關性奠定瞭基礎.
목적:구건함인류양환단백환원매(TR)기인적중조선병독재체,탐토TR적항양화공능여신경퇴행성질병적상관성.방법:종중조질립pGEM-TR상용내절매절하편마500개안기산적전장TR cDNA편단,병련접천사질립pShuttle,재쌍매절pShuttle-TR.장대유CMV계동자적목적편단,삽입E1、E3결실적Adeno-X병독DNA중,이Adeno-TR DNA통과지질체전염HEK293세포,획득중조선병독Adeno-TR진행PCR감정급병독적도측정.용중조선병독감염CV1세포,통과면역형광염색여Western blot분별검측중조선병독감염적세포상화렬해액중TR단백적표체.결과:중조선병독Adeno-TR적병독적도위4.4×1011pfu/L.PCR、형광현미경증실,이급Western bolt분석,재상대분자질량(Mr)약55 000처균출현특이성조대.결론:성공지구건료중조선병독재체,병능개도외원기인TR표체,위진일보연구TR적공능급기여질병적상관성전정료기출.
