CAJ | 학술논문

目的为提高体外转基因(ex vivo)治疗帕金森病大鼠模型的疗效,本实验拟比较两种基因表达载体介导的外源基因在两种不同运载细胞的瞬时表达效率. 方法分别将酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组表达质粒和重组逆转录病毒导入原代培养的大鼠成纤维细胞和脑胶质细胞,用免疫组织化学检测TH的表达效率;Western blot法检测样品中TH特异性条带并转换成A值,以比较其在不同细胞中表达的相对含量. 结果免疫组织化学检测表明,表达质粒的转染率为5%～7%,逆转率病毒的感染率为18%～20%;根据GDNF标准品蛋白条带含量与Western blot结果的相应A值的标准曲线,推断出质粒转染和逆转率病毒感染的成纤维细胞中单个阳性细胞表达的TH相对平均含量分别为4.76×10-2A和4.35×10-2A,质粒转染和逆转率病毒感染的脑胶质细胞分别是5.45×10-2A和5.05×10-2A. 结论不论是质粒载体还是逆转录病毒载体所携带的外源基因在两种细胞的单个阳性细胞中的表达无显著性差异.但由于逆转录病毒载体的感染率高于质粒载体,对于原代培养的成纤维细胞和脑胶质细胞,逆转率病毒载体是一种更好的表达载体.
목적위제고체외전기인(ex vivo)치료파금삼병대서모형적료효,본실험의비교량충기인표체재체개도적외원기인재량충불동운재세포적순시표체효솔. 방법분별장락안산간화매(TH)기인적중조표체질립화중조역전록병독도입원대배양적대서성섬유세포화뇌효질세포,용면역조직화학검측TH적표체효솔;Western blot법검측양품중TH특이성조대병전환성A치,이비교기재불동세포중표체적상대함량. 결과면역조직화학검측표명,표체질립적전염솔위5%～7%,역전솔병독적감염솔위18%～20%;근거GDNF표준품단백조대함량여Western blot결과적상응A치적표준곡선,추단출질립전염화역전솔병독감염적성섬유세포중단개양성세포표체적TH상대평균함량분별위4.76×10-2A화4.35×10-2A,질립전염화역전솔병독감염적뇌효질세포분별시5.45×10-2A화5.05×10-2A. 결론불론시질립재체환시역전록병독재체소휴대적외원기인재량충세포적단개양성세포중적표체무현저성차이.단유우역전록병독재체적감염솔고우질립재체,대우원대배양적성섬유세포화뇌효질세포,역전솔병독재체시일충경호적표체재체.