科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2005年
3期
232-237
,共6页
高冠军%陆辉明%黄丽芬%华跃进
高冠軍%陸輝明%黃麗芬%華躍進
고관군%륙휘명%황려분%화약진
Deinococcus radiodurans R1 pprI 突变 补偿 功能
Deinococcus radiodurans R1 pprI 突變 補償 功能
Deinococcus radiodurans R1 pprI 돌변 보상 공능
PprI是近来在耐辐射球菌Deinococcus radiodurans中发现的一个极其重要的DNA修复开关基因. 以已测序的野生型菌株R1为材料, 运用PCR突变法将克隆具有自身GroEL启动子和卡那霉素抗性基因的DNA片段反向重组到pprI基因中去, 首次获得了卡那霉素抗性的、pprI功能完全破坏的突变株YR1. 辐射细胞生存率结果表明, YR1对辐射异常敏感. 另外, 将含有GroEL启动子和卡那霉素抗性基因的DNA片段重组到质粒pRADZ3中, 获得了具有卡那霉素抗性的表达质粒pRADK; 再将体外克隆的具有pprI完整基因和C-末端结构域截短的PprI蛋白基因片段分别重组到pRADK中. 研究结果表明, 含有pprI完整基因的表达质粒在YR1中能够正常表达, 并完全恢复到野生型的极端抗性; 而C-末端结构域截短的PprI蛋白基因片段虽能在YR1中正常表达, 但对辐射异常敏感, 不能恢复其极端抗性. 上述pprI基因功能缺陷性和功能补偿性突变株的建立, 为深入研究细胞体内PprI蛋白质的定位、结构域与功能的关系, 以及原位研究PprI蛋白质的理化特性提供了十分有效的方法.
PprI是近來在耐輻射毬菌Deinococcus radiodurans中髮現的一箇極其重要的DNA脩複開關基因. 以已測序的野生型菌株R1為材料, 運用PCR突變法將剋隆具有自身GroEL啟動子和卡那黴素抗性基因的DNA片段反嚮重組到pprI基因中去, 首次穫得瞭卡那黴素抗性的、pprI功能完全破壞的突變株YR1. 輻射細胞生存率結果錶明, YR1對輻射異常敏感. 另外, 將含有GroEL啟動子和卡那黴素抗性基因的DNA片段重組到質粒pRADZ3中, 穫得瞭具有卡那黴素抗性的錶達質粒pRADK; 再將體外剋隆的具有pprI完整基因和C-末耑結構域截短的PprI蛋白基因片段分彆重組到pRADK中. 研究結果錶明, 含有pprI完整基因的錶達質粒在YR1中能夠正常錶達, 併完全恢複到野生型的極耑抗性; 而C-末耑結構域截短的PprI蛋白基因片段雖能在YR1中正常錶達, 但對輻射異常敏感, 不能恢複其極耑抗性. 上述pprI基因功能缺陷性和功能補償性突變株的建立, 為深入研究細胞體內PprI蛋白質的定位、結構域與功能的關繫, 以及原位研究PprI蛋白質的理化特性提供瞭十分有效的方法.
PprI시근래재내복사구균Deinococcus radiodurans중발현적일개겁기중요적DNA수복개관기인. 이이측서적야생형균주R1위재료, 운용PCR돌변법장극륭구유자신GroEL계동자화잡나매소항성기인적DNA편단반향중조도pprI기인중거, 수차획득료잡나매소항성적、pprI공능완전파배적돌변주YR1. 복사세포생존솔결과표명, YR1대복사이상민감. 령외, 장함유GroEL계동자화잡나매소항성기인적DNA편단중조도질립pRADZ3중, 획득료구유잡나매소항성적표체질립pRADK; 재장체외극륭적구유pprI완정기인화C-말단결구역절단적PprI단백기인편단분별중조도pRADK중. 연구결과표명, 함유pprI완정기인적표체질립재YR1중능구정상표체, 병완전회복도야생형적겁단항성; 이C-말단결구역절단적PprI단백기인편단수능재YR1중정상표체, 단대복사이상민감, 불능회복기겁단항성. 상술pprI기인공능결함성화공능보상성돌변주적건립, 위심입연구세포체내PprI단백질적정위、결구역여공능적관계, 이급원위연구PprI단백질적이화특성제공료십분유효적방법.
