CAJ | 학술논문

目的:研究TRAIL基因抗肿瘤作用旁观者效应的发生机制.方法:腺病毒Ad/Lac-Z转染肿瘤细胞后作为标记的旁观者细胞,腺病毒Ad/g-TRAIL转染肿瘤细胞作为效应细胞,在6孔Transwell培养板上同一孔内应用隔离或混合培养旁观者细胞和效应细胞的方法,通过检测旁观者细胞Lac-Z酶的活性,以明确TRAIL基因旁观者效应的发生机制.结果:检测了不同来源的肿瘤细胞株,包括大肠癌细胞株DLD1和Lovo、肺癌细胞株A549、肝癌细胞株HepG2、乳腺癌细胞株MDA-MB231、卵巢癌细胞株DOV13.各株肿瘤细胞转染Ad/g-TRAIL后ELISA方法均未检测出培养液中出现可溶性TRAIL(s-TRAIL);隔离培养效应细胞与旁观者细胞,旁观者细胞的Lac-Z活性与PBS及腺病毒Ad/CMV-GFP对照组无明显差异,而混合培养组其活性明显低于对照组(P＜0.05);混合培养效应细胞与旁观者细胞(1∶1),发现高密度细胞生长组其旁观者效应明显大于低密度生长组(P＜0.05);FACS检测Sub G0/G1发现DOV13细胞在高密度生长组显著高于低密度生长组(P＜0.05);荧光及相差显微镜下观察发现TRAIL转染细胞可诱导周围旁观者细胞发生凋亡而自己并不首先发生凋亡.结论:腺病毒介导的TRAIL基因的旁观者效应是通过TRIAL蛋白表达并定位于细胞膜上,通过细胞接触结合于邻近肿瘤细胞膜上的TRAIL受体而诱导旁观者肿瘤细胞的凋亡,而不是通过水解膜配体形成s-TRAIL而发生旁观者效应,这种作用是细胞接触依赖的.
목적:연구TRAIL기인항종류작용방관자효응적발생궤제.방법:선병독Ad/Lac-Z전염종류세포후작위표기적방관자세포,선병독Ad/g-TRAIL전염종류세포작위효응세포,재6공Transwell배양판상동일공내응용격리혹혼합배양방관자세포화효응세포적방법,통과검측방관자세포Lac-Z매적활성,이명학TRAIL기인방관자효응적발생궤제.결과:검측료불동래원적종류세포주,포괄대장암세포주DLD1화Lovo、폐암세포주A549、간암세포주HepG2、유선암세포주MDA-MB231、란소암세포주DOV13.각주종류세포전염Ad/g-TRAIL후ELISA방법균미검측출배양액중출현가용성TRAIL(s-TRAIL);격리배양효응세포여방관자세포,방관자세포적Lac-Z활성여PBS급선병독Ad/CMV-GFP대조조무명현차이,이혼합배양조기활성명현저우대조조(P＜0.05);혼합배양효응세포여방관자세포(1∶1),발현고밀도세포생장조기방관자효응명현대우저밀도생장조(P＜0.05);FACS검측Sub G0/G1발현DOV13세포재고밀도생장조현저고우저밀도생장조(P＜0.05);형광급상차현미경하관찰발현TRAIL전염세포가유도주위방관자세포발생조망이자기병불수선발생조망.결론:선병독개도적TRAIL기인적방관자효응시통과TRIAL단백표체병정위우세포막상,통과세포접촉결합우린근종류세포막상적TRAIL수체이유도방관자종류세포적조망,이불시통과수해막배체형성s-TRAIL이발생방관자효응,저충작용시세포접촉의뢰적.