CAJ | 학술논문

目的检测人胰腺癌Patu 8988细胞K-ras基因点突变形式,并观察针对该点突变的硫代反义寡核苷酸在体内外对Patu 8988细胞增殖和凋亡的影响.方法顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法和基因测序检测Patu 8988细胞K-ras点突变形式,根据点突变形式设计并合成硫代反义寡核苷酸(K-ras mutation ASODN)作用Patu 8988,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;流式细胞术(FCM)检测K-ras蛋白表达和细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测K-ras mRNA表达水平;以Patu 8988细胞建立裸鼠胰腺癌模型观察K-ras mutation ASODN在体内的抗肿瘤效果.结果 PCR-SSP法和基因测序检测表明Patu 8988细胞存在K-ras基因第12密码子点突变,其突变方式为GGT→GTT.体外实验表明K-ras mutation ASODN组较正义寡核苷酸(SODN)组、随机寡核苷酸(RODN)组和空白对照组可明显抑制Patu 8988细胞生长(P＜0.01),并呈时间-剂量效应关系;转染48 h后,K-ras mutation ASODN组的K-ras蛋白和mRNA表达程度较SODN组、RODN组和对照组均明显降低(P＜0.01),而细胞凋亡明显增多(P＜0.05).体内实验表明K-ras mutation ASODN较SODN组、RODN组和对照组能有效抑制BALB/C裸鼠人胰腺癌的生长(P＜0.01).结论针对K-ras基因第12密码子点突变的反义寡核苷酸可明显抑制人胰腺癌Patu8988细胞生长,促进细胞凋亡,其机制可能是通过下调K-ras蛋白和K-ras mRNA表达而起作用.
목적 검측인이선암Patu 8988세포K-ras기인점돌변형식,병관찰침대해점돌변적류대반의과핵감산재체내외대Patu 8988세포증식화조망적영향.방법 순서특이인물취합매련반응(PCR-SSP)법화기인측서검측Patu 8988세포K-ras점돌변형식,근거점돌변형식설계병합성류대반의과핵감산(K-ras mutation ASODN)작용Patu 8988,통과새서람(MTT)비색법검측세포생장정황;류식세포술(FCM)검측K-ras단백표체화세포조망;역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측K-ras mRNA표체수평;이Patu 8988세포건립라서이선암모형관찰K-ras mutation ASODN재체내적항종류효과.결과 PCR-SSP법화기인측서검측표명Patu 8988세포존재K-ras기인제12밀마자점돌변,기돌변방식위GGT→GTT.체외실험표명K-ras mutation ASODN조교정의과핵감산(SODN)조、수궤과핵감산(RODN)조화공백대조조가명현억제Patu 8988세포생장(P＜0.01),병정시간-제량효응관계;전염48 h후,K-ras mutation ASODN조적K-ras단백화mRNA표체정도교SODN조、RODN조화대조조균명현강저(P＜0.01),이세포조망명현증다(P＜0.05).체내실험표명K-ras mutation ASODN교SODN조、RODN조화대조조능유효억제BALB/C라서인이선암적생장(P＜0.01).결론 침대K-ras기인제12밀마자점돌변적반의과핵감산가명현억제인이선암Patu8988세포생장,촉진세포조망,기궤제가능시통과하조K-ras단백화K-ras mRNA표체이기작용.