中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2007年
2期
105-107
,共3页
尤红%丛敏%王萍%阎钟钰%徐雍%卢炎%王宝恩%贾继东
尤紅%叢敏%王萍%閻鐘鈺%徐雍%盧炎%王寶恩%賈繼東
우홍%총민%왕평%염종옥%서옹%로염%왕보은%가계동
依赖病毒%肝炎病毒,乙型%树突细胞
依賴病毒%肝炎病毒,乙型%樹突細胞
의뢰병독%간염병독,을형%수돌세포
目的 探讨腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)为载体的含有HBV-S、C或X基因的重组病毒(rAAV-HBV-S,C,X)感染正常人树突状细胞的效率.方法 分别构建含有HBV-S、C和X基因的AAV质粒,在293细胞中包装成重组病毒,测定病毒滴度.从正常人外周血中分离出单核细胞进行体外培养,在培养的第1天分别用rAAV-HBV-S、C、X和作为对照的293细胞裂解液感染刺激单核细胞,感染后的单核细胞在GM-CSF、IL-4和TNF-α作用下继续培养7 d获得成熟的树突状细胞.用RT-PCR及流式细胞仪细胞内染色检测HBV基因的RNA和蛋白的表达.结果 重组rAAV-HBV-S、C、X的病毒滴度可以达到107拷贝/ml,用重组病毒分别感染树突状细胞.与对照组相比,感染的树突状细胞可表达相应的HBV基因RNA,流式细胞仪检测显示约90%的树突状细胞有相应HBV蛋白的表达.结论 rAAV-HBV可有效感染树突状细胞,提示可以通过该途径刺激树突状细胞提呈抗原.
目的 探討腺相關病毒(Adeno-associated virus,AAV)為載體的含有HBV-S、C或X基因的重組病毒(rAAV-HBV-S,C,X)感染正常人樹突狀細胞的效率.方法 分彆構建含有HBV-S、C和X基因的AAV質粒,在293細胞中包裝成重組病毒,測定病毒滴度.從正常人外週血中分離齣單覈細胞進行體外培養,在培養的第1天分彆用rAAV-HBV-S、C、X和作為對照的293細胞裂解液感染刺激單覈細胞,感染後的單覈細胞在GM-CSF、IL-4和TNF-α作用下繼續培養7 d穫得成熟的樹突狀細胞.用RT-PCR及流式細胞儀細胞內染色檢測HBV基因的RNA和蛋白的錶達.結果 重組rAAV-HBV-S、C、X的病毒滴度可以達到107拷貝/ml,用重組病毒分彆感染樹突狀細胞.與對照組相比,感染的樹突狀細胞可錶達相應的HBV基因RNA,流式細胞儀檢測顯示約90%的樹突狀細胞有相應HBV蛋白的錶達.結論 rAAV-HBV可有效感染樹突狀細胞,提示可以通過該途徑刺激樹突狀細胞提呈抗原.
목적 탐토선상관병독(Adeno-associated virus,AAV)위재체적함유HBV-S、C혹X기인적중조병독(rAAV-HBV-S,C,X)감염정상인수돌상세포적효솔.방법 분별구건함유HBV-S、C화X기인적AAV질립,재293세포중포장성중조병독,측정병독적도.종정상인외주혈중분리출단핵세포진행체외배양,재배양적제1천분별용rAAV-HBV-S、C、X화작위대조적293세포렬해액감염자격단핵세포,감염후적단핵세포재GM-CSF、IL-4화TNF-α작용하계속배양7 d획득성숙적수돌상세포.용RT-PCR급류식세포의세포내염색검측HBV기인적RNA화단백적표체.결과 중조rAAV-HBV-S、C、X적병독적도가이체도107고패/ml,용중조병독분별감염수돌상세포.여대조조상비,감염적수돌상세포가표체상응적HBV기인RNA,류식세포의검측현시약90%적수돌상세포유상응HBV단백적표체.결론 rAAV-HBV가유효감염수돌상세포,제시가이통과해도경자격수돌상세포제정항원.
