CAJ | 학술논문

目的筛选出可与血管内皮生长因子受体2(KDR)mRNA高效、特异结合的反义寡核苷酸,探讨其体外抗肿瘤作用.方法先用寡核苷酸库杂交和计算机预测初筛反义寡核苷酸;经寡核苷酸芯片杂交验证,挑选与KDR mRNA有强杂交信号的反义寡核苷酸,用MTT法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)探讨反义寡核苷酸对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖和KDR表达的抑制作用.结果在寡核苷酸库杂交筛选出的13条反义寡核苷酸中,有8条(8/13,61.5%)在芯片杂交中显示较强杂交信号;而在计算机预测设计的17条探针中,只有1条显示较强信号.合成杂交信号较强的9条硫代反义寡核苷酸,均能有效抑制MCF-7细胞增殖,并呈剂量依赖性.其中抑制率最高的2条反义寡核苷酸为asON4和asON7,由寡核苷酸库杂交联合芯片杂交筛出,在0.8 μmol/L时抑制率分别为51.6%和62.2%;同时,这2条反义寡核苷酸在mRNA水平和蛋白质水平抑制了KDR基因表达,并呈剂量相关性.结论寡核苷酸库杂交筛选和寡核苷酸芯片杂交筛选的结果有较好一致性,将寡核苷酸库和寡核苷酸芯片联用是一种较好筛选反义寡核苷酸方法.KDR反义寡核苷酸有明显的抗肿瘤作用.
목적사선출가여혈관내피생장인자수체2(KDR)mRNA고효、특이결합적반의과핵감산,탐토기체외항종류작용.방법선용과핵감산고잡교화계산궤예측초사반의과핵감산;경과핵감산심편잡교험증,도선여KDR mRNA유강잡교신호적반의과핵감산,용MTT법、역전록취합매련반응(RT-PCR)화면역인적(Western blotting)탐토반의과핵감산대유선암세포계MCF-7세포증식화KDR표체적억제작용.결과재과핵감산고잡교사선출적13조반의과핵감산중,유8조(8/13,61.5%)재심편잡교중현시교강잡교신호;이재계산궤예측설계적17조탐침중,지유1조현시교강신호.합성잡교신호교강적9조류대반의과핵감산,균능유효억제MCF-7세포증식,병정제량의뢰성.기중억제솔최고적2조반의과핵감산위asON4화asON7,유과핵감산고잡교연합심편잡교사출,재0.8 μmol/L시억제솔분별위51.6%화62.2%;동시,저2조반의과핵감산재mRNA수평화단백질수평억제료KDR기인표체,병정제량상관성.결론과핵감산고잡교사선화과핵감산심편잡교사선적결과유교호일치성,장과핵감산고화과핵감산심편련용시일충교호사선반의과핵감산방법.KDR반의과핵감산유명현적항종류작용.