基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2003年
5期
538-542
,共5页
曾琼%赵祝香%李冰%冉丕鑫%陈顺存
曾瓊%趙祝香%李冰%冉丕鑫%陳順存
증경%조축향%리빙%염비흠%진순존
内皮型一氧化氮合酶%克隆
內皮型一氧化氮閤酶%剋隆
내피형일양화담합매%극륭
本研究从人脐静脉血管内皮细胞中提取总RNA,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法,扩增出人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)cDNA,总长度为3731bp.将其克隆入pUCm-T载体质粒,序列分析表明,克隆所得片段含有完整开放阅读框架,与GenBank中heNOS cDNA序列同源性达99.93%,在此基础上发现有若干核酸多态性.将该基因片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,用脂质体转染法将pcDNA3.0/heNOS转染到COS-7细胞株,RT-PCR、Western blot分别检测到外源性eNOS基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达,分析表明所表达的heNOS蛋白质分子量为145ku;L-14C-精氨酸掺入同位素法检测证实所表达的eNOS蛋白具有生物学活性,能将精氨酸氧化为瓜氨酸.
本研究從人臍靜脈血管內皮細胞中提取總RNA,採用逆轉錄PCR(RT-PCR)方法,擴增齣人內皮型一氧化氮閤酶(heNOS)cDNA,總長度為3731bp.將其剋隆入pUCm-T載體質粒,序列分析錶明,剋隆所得片段含有完整開放閱讀框架,與GenBank中heNOS cDNA序列同源性達99.93%,在此基礎上髮現有若榦覈痠多態性.將該基因片段亞剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.0上,用脂質體轉染法將pcDNA3.0/heNOS轉染到COS-7細胞株,RT-PCR、Western blot分彆檢測到外源性eNOS基因在mRNA水平和蛋白質水平的錶達,分析錶明所錶達的heNOS蛋白質分子量為145ku;L-14C-精氨痠摻入同位素法檢測證實所錶達的eNOS蛋白具有生物學活性,能將精氨痠氧化為瓜氨痠.
본연구종인제정맥혈관내피세포중제취총RNA,채용역전록PCR(RT-PCR)방법,확증출인내피형일양화담합매(heNOS)cDNA,총장도위3731bp.장기극륭입pUCm-T재체질립,서렬분석표명,극륭소득편단함유완정개방열독광가,여GenBank중heNOS cDNA서렬동원성체99.93%,재차기출상발현유약간핵산다태성.장해기인편단아극륭도진핵표체재체pcDNA3.0상,용지질체전염법장pcDNA3.0/heNOS전염도COS-7세포주,RT-PCR、Western blot분별검측도외원성eNOS기인재mRNA수평화단백질수평적표체,분석표명소표체적heNOS단백질분자량위145ku;L-14C-정안산참입동위소법검측증실소표체적eNOS단백구유생물학활성,능장정안산양화위과안산.
