微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2006年
6期
906-911
,共6页
郭青云%蔡全信%韩蓓%袁志明
郭青雲%蔡全信%韓蓓%袁誌明
곽청운%채전신%한배%원지명
苏云金芽孢杆菌%Cry1Aa%Cry1Ca%结构域交换%生物测定
囌雲金芽孢桿菌%Cry1Aa%Cry1Ca%結構域交換%生物測定
소운금아포간균%Cry1Aa%Cry1Ca%결구역교환%생물측정
通过体外重组的方法,实现了苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Aa和Cry1Ca的功能性结构域Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的互换,得到了6株苏云金杆菌重组菌株BT-ACC,BT-AAC,BT-ACA,BT-CAA,BT-CCA和BT-CAC.SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组菌株BT-CAA和BT-CCA能表达产生135kDa左右的杂交晶体蛋白Cry1CAA和Cry1CCA,但其蛋白表达量较野生型Cry1Aa和Cry1Ca低.用牛胰蛋白酶对杂交晶体蛋白Cry1CAA、Cry1CCA及野生型Cry1Aa和Cry1Ca进行消化,证明所有晶体蛋白都能产生65kDa的活性毒素.电镜观察发现,野生菌株BT-Cry1Aa和BT-Cry1Ca形成典型的菱形晶体,而重组菌株BT-CCA和BT-CAA则形成球形或颗粒状杂交晶体.纯化晶体的生物测定显示,杂交晶体蛋白Cry1CAA和Cry1CCA对甜菜夜蛾的毒力比野生型晶体蛋白降低3～5倍,对棉铃虫的毒力比野生型晶体蛋白降低了190～260倍.研究结果表明,苏云金杆菌晶体蛋白不同结构域的相互作用会影响杂交晶体蛋白的表达、晶体形态和杀虫活性.
通過體外重組的方法,實現瞭囌雲金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白Cry1Aa和Cry1Ca的功能性結構域Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的互換,得到瞭6株囌雲金桿菌重組菌株BT-ACC,BT-AAC,BT-ACA,BT-CAA,BT-CCA和BT-CAC.SDS-PAGE和Western blot分析錶明,重組菌株BT-CAA和BT-CCA能錶達產生135kDa左右的雜交晶體蛋白Cry1CAA和Cry1CCA,但其蛋白錶達量較野生型Cry1Aa和Cry1Ca低.用牛胰蛋白酶對雜交晶體蛋白Cry1CAA、Cry1CCA及野生型Cry1Aa和Cry1Ca進行消化,證明所有晶體蛋白都能產生65kDa的活性毒素.電鏡觀察髮現,野生菌株BT-Cry1Aa和BT-Cry1Ca形成典型的蔆形晶體,而重組菌株BT-CCA和BT-CAA則形成毬形或顆粒狀雜交晶體.純化晶體的生物測定顯示,雜交晶體蛋白Cry1CAA和Cry1CCA對甜菜夜蛾的毒力比野生型晶體蛋白降低3～5倍,對棉鈴蟲的毒力比野生型晶體蛋白降低瞭190～260倍.研究結果錶明,囌雲金桿菌晶體蛋白不同結構域的相互作用會影響雜交晶體蛋白的錶達、晶體形態和殺蟲活性.
통과체외중조적방법,실현료소운금아포간균살충정체단백Cry1Aa화Cry1Ca적공능성결구역Ⅰ、Ⅱ화Ⅲ적호환,득도료6주소운금간균중조균주BT-ACC,BT-AAC,BT-ACA,BT-CAA,BT-CCA화BT-CAC.SDS-PAGE화Western blot분석표명,중조균주BT-CAA화BT-CCA능표체산생135kDa좌우적잡교정체단백Cry1CAA화Cry1CCA,단기단백표체량교야생형Cry1Aa화Cry1Ca저.용우이단백매대잡교정체단백Cry1CAA、Cry1CCA급야생형Cry1Aa화Cry1Ca진행소화,증명소유정체단백도능산생65kDa적활성독소.전경관찰발현,야생균주BT-Cry1Aa화BT-Cry1Ca형성전형적릉형정체,이중조균주BT-CCA화BT-CAA칙형성구형혹과립상잡교정체.순화정체적생물측정현시,잡교정체단백Cry1CAA화Cry1CCA대첨채야아적독력비야생형정체단백강저3～5배,대면령충적독력비야생형정체단백강저료190～260배.연구결과표명,소운금간균정체단백불동결구역적상호작용회영향잡교정체단백적표체、정체형태화살충활성.
