哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2007年
6期
541-543
,共3页
郭蓉姣%黄秀艳%梁兆端%曾耀英
郭蓉姣%黃秀豔%樑兆耑%曾耀英
곽용교%황수염%량조단%증요영
NKT细胞%α-Galcer%IL-2
NKT細胞%α-Galcer%IL-2
NKT세포%α-Galcer%IL-2
目的 探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法 .方法 分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性.结果 脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Galcer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强.在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC 33.8%(P＜0.05).结论 在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%.在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%.
目的 探索小鼠脾髒NKT細胞的分離、純化及體外培養擴增的方法 .方法 分離小鼠脾細胞,製成單細胞懸液,α-半乳糖神經鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同時間點取樣,利用雙色免疫熒光抗體標記技術和流式細胞術(FACS)檢測NKT細胞純度,併用MTT法檢測其對靶細胞K562的殺傷活性.結果 脾NKT細胞在第0、4、8、12天計數細胞總數為0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天純度分彆為(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Galcer和rhIL-2作用下,純化的NKT細胞較脾新鮮分離的單箇覈細胞對靶細胞K562的殺傷作用彊.在效靶比20∶1時,培養時間為4、8,12天的NKT細胞殺傷率分彆為52.7%、71.2%和85.7%,明顯高于脾MNC 33.8%(P＜0.05).結論 在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT細胞得到擴增,細胞純度約為22%.在效靶比20∶1時,NKT細胞對K562細胞殺傷率約為86%.
목적 탐색소서비장NKT세포적분리、순화급체외배양확증적방법 .방법 분리소서비세포,제성단세포현액,α-반유당신경초알순(α-galactosylceramide,α-Galcer)화rhIL-2작용하자격기활화증식,불동시간점취양,이용쌍색면역형광항체표기기술화류식세포술(FACS)검측NKT세포순도,병용MTT법검측기대파세포K562적살상활성.결과 비NKT세포재제0、4、8、12천계수세포총수위0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107화(2.2±0.2)×107,제0、4、8、12천순도분별위(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%화(21.36±4.34)%;α-Galcer화rhIL-2작용하,순화적NKT세포교비신선분리적단개핵세포대파세포K562적살상작용강.재효파비20∶1시,배양시간위4、8,12천적NKT세포살상솔분별위52.7%、71.2%화85.7%,명현고우비MNC 33.8%(P＜0.05).결론 재α-Galcer화rhIL-2작용하,소서NKT세포득도확증,세포순도약위22%.재효파비20∶1시,NKT세포대K562세포살상솔약위86%.
